多種策略逆轉(zhuǎn)P-糖蛋白和乳腺癌耐藥蛋白介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥.pdf

1、中山大學博士學位論文多種策略逆轉(zhuǎn)P一糖蛋白和乳腺癌耐藥蛋白介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥專業(yè)：博士研究生：導(dǎo)師：腫瘤學石智符立梧教授答辯委員會成員(簽名)主席：鼉齜陟委員：200磣Iy石智多種策略逆轉(zhuǎn)P糖蛋白和乳腺癌耐藥蛋白介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥得耐藥性。理論上克服MDR有兩種方法：一、開發(fā)對MDR腫瘤細胞不具有抗藥性的新抗癌藥物：二、尋找MDR逆轉(zhuǎn)劑與抗癌藥物合用，恢復(fù)MDR腫瘤細胞對抗癌藥物的敏感性。盡管現(xiàn)階段現(xiàn)有的眾多MDR逆轉(zhuǎn)劑在體外及動物模型

2、中都具有很好的逆轉(zhuǎn)效果，佃是在臨床實驗中，這些逆轉(zhuǎn)劑由于可引起嚴重的毒副作用、干擾傳統(tǒng)抗癌藥物的藥代動力學等種種原因，都沒有取得預(yù)期的臨床效果，因此急需開發(fā)新的逆轉(zhuǎn)劑來逆轉(zhuǎn)MDR。近年來，隨著科學技術(shù)的迅猛發(fā)展，新的生物技術(shù)如RNA干擾(RNAinterfering，RNAi)的出現(xiàn)，新的天然藥物的分離以及新的化合物的合成，為成功開發(fā)MDR逆轉(zhuǎn)劑帶來了希望。本課題先后采用多種策略來逆轉(zhuǎn)Pgp和BCRP介導(dǎo)的腫瘤MDR，并取得了較好的結(jié)果

3、。1通過篩選發(fā)現(xiàn)，經(jīng)PCR合成的MDRIVsiRNA表達框架的干擾效果在五個MDRl(IV)siRNA表達框架中是最好的，然后構(gòu)建含有該表達框架的質(zhì)粒pEGFPC2一Hl—MDRIshDNA，并將其轉(zhuǎn)染入過表達Pgp的MDR腫瘤細胞KB400，通過G418篩選得到穩(wěn)定表達MDRIshRNA的細胞克隆KBv200／MDRIsh。KB，200／MDRlsh細胞的MDRl基因的mRNA和P—gp表達降低超過900／00，并且持續(xù)穩(wěn)定表達增強型

4、綠色熒光蛋白和低水平的MDRI基因超過lO代。與KBv200細胞相比，KB。200／MDRlsh細胞相對敏感株KB細胞對長春新堿的抗藥性從624倍降到lO5倍，對阿霉素的抗藥性從745倍降到95倍，并且胞內(nèi)的阿霉素積累從O30008nmoles／10％ells增加到086016nmoles／lO％ells，胞內(nèi)的羅丹明123的熒光強度從358163／106cells胞增加到1396307／106cells。在裸鼠移植瘤模型中，長春新堿(

5、02mg／kg)對KBv200／MDRIsh細胞移植瘤的抑瘤率達到42O％，而對KB，2∞細胞移植瘤沒有抑制作用。這些結(jié)果說明在體內(nèi)和體外的模型中采用RNA干擾技術(shù)沉默MDRI基因表達可以有效的逆轉(zhuǎn)MDR。在探討MDR形成機理及相應(yīng)的逆轉(zhuǎn)機制的過程中，發(fā)現(xiàn)與敏感株細胞KB和MCF7相比，MDR腫瘤細胞KB。200和MCF7／Adr不僅過表達PgP，而且凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisproteins1APs)家族成