轉(zhuǎn)錄因子FEZF2在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞發(fā)育過程中的作用.pdf

1、目的:FEZF2是一種具有鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子，選擇性的表達(dá)在大腦皮層第V皮層的下行性錐體投射神經(jīng)元及前體細(xì)胞中。FEZF2參與大腦皮層投射神經(jīng)元的產(chǎn)生和分化，對大腦皮層中投射神經(jīng)元的發(fā)育具有決定性作用。視網(wǎng)膜與大腦皮層共同起源于神經(jīng)外胚層，并且都具有層次結(jié)構(gòu)。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)是將視覺信息從外界傳入大腦皮層的唯一通路。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞與大腦皮層第V皮層的投射神經(jīng)元相似，都具有長距離，向外生長的特性。因而我們推測RGCs的調(diào)控可

2、能與大腦皮質(zhì)神經(jīng)元具有類似性。本課題主要研究FEZF2在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中的表達(dá)及其作用。
　　方法:首先用免疫熒光的方法檢測FEZF2在視網(wǎng)膜及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中的表達(dá)情況通過胚胎電轉(zhuǎn)染的方法，在視網(wǎng)膜中電轉(zhuǎn)入Fezf2的干擾質(zhì)粒和空白對照質(zhì)粒，觀察Fezf2受到抑制后神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的變化。并將Fezf2 flox/flox純和小鼠與Six3-cre小鼠交配獲得子一代小鼠，將子一代小鼠互相交配，通過基因型鑒定選出Fezf2 flox/fl

3、ox純和并且Six3-cre陽性的敲除小鼠（實驗組）與B6（對照組）的子二代小鼠。取小鼠一只眼睛的視網(wǎng)膜提RNA、進(jìn)行Q-PCR鑒定Fezf2和Brn3b的表達(dá)，另一只眼睛則固定、脫水、冰凍切片或視網(wǎng)膜鋪片做免疫熒光，檢測敲除小鼠視網(wǎng)膜中神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的變化。
　　結(jié)果:通過免疫熒光結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)FEZF2表達(dá)在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中，并且在E16.5時表達(dá)最高。Fezf2下調(diào)后BRN3A表達(dá)沒有明顯變化，而BRN3B的表達(dá)明顯下降。免疫熒