轉(zhuǎn)錄因子FEZF2在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞發(fā)育中的表達(dá)和功能研究.pdf

1、目的:哺乳動(dòng)物的視網(wǎng)膜包含七種細(xì)胞（視錐細(xì)胞，視桿細(xì)胞，水平細(xì)胞，雙極細(xì)胞，無長(zhǎng)突細(xì)胞，節(jié)細(xì)胞和Müller細(xì)胞）。它們共同起源視網(wǎng)膜神經(jīng)祖細(xì)胞，但是它們的產(chǎn)生在時(shí)間及空間上卻是有著嚴(yán)格的順序。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞是第一個(gè)產(chǎn)生的細(xì)胞類型，但是其形成的機(jī)制目前尚不明了。轉(zhuǎn)錄因子FEZF2在大腦投射神經(jīng)元發(fā)育過程中具有著命運(yùn)決定和軸突導(dǎo)向作用，但是在視網(wǎng)膜中還未有研究。本課題的研究目的是確定轉(zhuǎn)錄因子FEZF2在視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞中的表達(dá)和功能。

2、>　　 方法:我們用原位雜交技術(shù)來檢測(cè)Fezf2在視網(wǎng)膜的表達(dá)情況，用免疫熒光技術(shù)來檢測(cè)其它視網(wǎng)膜標(biāo)記性基因的表達(dá)情況。對(duì)于Fezf2的功能實(shí)驗(yàn)，我們采用基因胚胎電轉(zhuǎn)的方法在E13.5的視網(wǎng)膜中來上調(diào)和下調(diào)Fezf2。并用流式細(xì)胞術(shù)分選出轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞，通過定量PCR檢測(cè)候選基因的表達(dá)。
　　 結(jié)果:我們觀察到Fzf2表達(dá)在E16.5的視網(wǎng)膜前體細(xì)胞層中，而在節(jié)細(xì)胞層沒有檢測(cè)到陽性信號(hào)。而Fezf2的反鏈基因和Fezf2的直接

3、抑制基因——Tbr1則都表達(dá)在E16.5及以后的節(jié)細(xì)胞層。當(dāng)我們?cè)谝暰W(wǎng)膜上過表達(dá)Fezf2后，發(fā)現(xiàn)部分轉(zhuǎn)染了Fzef2的節(jié)細(xì)胞不能遷移至節(jié)細(xì)胞層，這提示Fezf2的下調(diào)可能是節(jié)細(xì)胞遷移所必需的。另外，在過表達(dá)Fezf2的節(jié)細(xì)胞中幾乎沒有發(fā)現(xiàn)ISLET1，MATH5和DLX1/2的表達(dá)，且過表達(dá)Fezf2的節(jié)細(xì)胞的軸突也不能向上丘發(fā)出投射。與之相反，我們抑制了Fezf2的表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，除了BRN3B的表達(dá)受到抑制之外，其它的節(jié)細(xì)胞標(biāo)記性基因