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1、目的:MITF在多種細胞包括視網(wǎng)膜色素上皮細胞的發(fā)育和功能發(fā)揮著重要的作用。Mitf基因突變后小鼠出現(xiàn)小眼畸形,RPE細胞的發(fā)育異常以及神經(jīng)視網(wǎng)膜變性。本研究對Mitf在神經(jīng)視網(wǎng)膜退行性病變過程中的功能進行了探討。
方法:利用ERG檢測成年Mitf-/-小鼠的視功能,通過HE染色檢測神經(jīng)視網(wǎng)膜外核層的厚度變化,通過視網(wǎng)膜鋪片免疫熒光檢測神經(jīng)視網(wǎng)膜感光細胞的數(shù)目變化,通過冰凍切片免疫熒光檢測視網(wǎng)膜外核層細胞的凋亡情況,確定神經(jīng)視
2、網(wǎng)膜的退行性病變過程。使用WT和Mitf-/-的視網(wǎng)膜與RPE組合培養(yǎng)確定是否因為Mitf-/-RPE功能的改變導(dǎo)致的神經(jīng)視網(wǎng)膜退行性病變。篩選成熟的RPE表達的神經(jīng)營養(yǎng)因子,并驗證其對Miif-/-視網(wǎng)膜退行性病變是否具有挽救作用。
結(jié)果:ERG檢測成年Mitf-/-小鼠視功能發(fā)現(xiàn)其神經(jīng)視網(wǎng)膜的視功能缺陷。組織形態(tài)學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)Mitf/-神經(jīng)視網(wǎng)膜發(fā)生了退行性病變,外顆粒層厚度逐漸變薄,感光細胞發(fā)生凋亡,數(shù)目變少。通過DCT免
3、疫熒光明確出生后10天Mitf-/-小鼠的RPE仍然存在。通過視網(wǎng)膜與RPE組合培養(yǎng)確定WT的RPE可以部分挽救Mitf-/-的神經(jīng)視網(wǎng)膜退行性病變。通過篩選的在Mitf-/-RPE中低表達的生長因子,對Mitf-/-的神經(jīng)視網(wǎng)膜在體外進行培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)PEDF對Mitf-/-的神經(jīng)視網(wǎng)膜退行性變性具有一定的挽救效應(yīng)。
結(jié)論:Mitf-/-RPE功能異常可能與Mitf-/-小鼠神經(jīng)視網(wǎng)膜的退行性變性相關(guān)。RPE分泌的神經(jīng)營養(yǎng)因子包
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