EUK4010對(duì)Presenilin-1-Presenilin-2雙基因敲除小鼠神經(jīng)退行性病變的影響及其機(jī)理的研究.pdf

1、阿爾茨海默癥(Alzheimer’s disease,AD)是最常見的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,以大腦皮層、皮層下結(jié)構(gòu)出現(xiàn)典型的老年斑(Senile plaques,SP)和神經(jīng)纖維纏結(jié)(Neurofibrillary tangles,NFT)為主要病理特征。而早老素基因(Presenilin)的變異是引起家族遺傳性阿爾茨海默癥(Familial Alzheimer’s disease,FAD)的主要原因之一。
　　早老素是跨膜

2、的天冬氨酸蛋白酶,有Presenilin-1(PS1)和Presenilin-2(PS2)兩種類型。用前腦特異性敲除PS1的小鼠與PS2全身性敲除的小鼠繁育出的PS1/PS2雙基因敲除(dKO)小鼠表現(xiàn)出一系列類似AD的癥狀,包括認(rèn)知能力衰退和前腦退化等,但此機(jī)制尚未闡明。EUK4010是本實(shí)驗(yàn)室從近2000種中藥提取物中篩選出的一種單體化合物,經(jīng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其對(duì)阻止神經(jīng)元凋亡、下調(diào)Aβ基因表達(dá)有明顯作用。為測(cè)試這種藥物對(duì)于dKO小鼠的

3、作用,本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)2月齡和6月齡的dKO小鼠喂食5個(gè)月EUK4010后,通過組織學(xué)及行為學(xué)實(shí)驗(yàn)等方法檢測(cè)其對(duì)dKO小鼠神經(jīng)退行性癥狀的的影響。并通過檢測(cè)喂食藥物對(duì)氧化應(yīng)激水平和炎癥反應(yīng)因子的影響,初步探討了EUK4010改善dKO小鼠神經(jīng)退行性癥狀的分子機(jī)制。
　　1.EUK4010對(duì)dKO小鼠神經(jīng)退行性癥狀的影響分別對(duì)2月齡和6月齡的dKO小鼠喂食EUK4010后,使用開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、新異物體識(shí)別和恐懼性條件學(xué)習(xí)等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠的運(yùn)動(dòng)能

4、力和學(xué)習(xí)記憶能力。結(jié)果顯示,無論是從2月齡還是6月齡開始喂食,EUK4010對(duì)于dKO小鼠的運(yùn)動(dòng)和學(xué)習(xí)記憶能力均沒有明顯改善。但對(duì)比小鼠在喂藥前后的平均體重變化發(fā)現(xiàn),喂藥的dKO小鼠體重增長(zhǎng)較多,其中在2-6月齡的小鼠中有顯著差異。對(duì)鼠腦進(jìn)行冰凍切片并經(jīng)尼氏染色后發(fā)現(xiàn),喂食EUK4010的小鼠腦室明顯減小,海馬萎縮程度明顯減輕,這種效果在6-11月齡的小鼠中尤其顯著,但皮層厚度在兩個(gè)年齡段的小鼠中均無明顯差別。綜合行為學(xué)和形態(tài)學(xué)結(jié)果,E

5、UK4010能在一定程度上緩解前腦萎縮,部分改善神經(jīng)退行性癥狀,但對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力的改善不明顯。
　　2.EUK4010對(duì)dKO小鼠氧化應(yīng)激水平的影響本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)試皮層、海馬、肝臟、腎臟等組織內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物——MDA,抗氧化酶系——SOD和GSH-PX,以及尿液中DNA損傷的標(biāo)志物——8-OHdG的含量,檢測(cè)了喂食EUK4010對(duì)dKO小鼠在氧化應(yīng)激水平的影響,以探索EUK4010對(duì)dKO小鼠神經(jīng)退行性癥狀影響的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果

6、顯示,在被測(cè)的兩個(gè)年齡段,dKO小鼠的氧化應(yīng)激水平在大腦皮層、海馬中無明顯變化,在肝臟、腎臟中則有一定變化,而尿液中DNA損傷則非常顯著。喂食藥物后,各組織的MDA含量、SOD和GSH-PX活力以及8-OHdG的含量受到不同程度的影響,說明EUK4010對(duì)dKO小鼠氧化應(yīng)激水平有一定程度影響。
　　3.EUK4010對(duì)dKO小鼠炎癥反應(yīng)因子的影響本實(shí)驗(yàn)使用RT-PCR,Western blot等方法檢測(cè)了喂食EUK4010對(duì)dKO