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1、目的:用體外實(shí)驗(yàn)研究CXC家族趨化因子I-TAC在小膠質(zhì)細(xì)胞上的表達(dá)及其影響因素,同時(shí)觀察I-TAC對(duì)原代T細(xì)胞的增殖、分化、黏附分子表達(dá)及趨化作用的影響,從而探討I-TAC在神經(jīng)系統(tǒng)退行性變中可能發(fā)揮的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法:用LPS刺激小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞株N9,分別加入A β 42、TNF-α、DEX以及特異性 TLR4抗體,采用RT-PCR半定量分析檢測(cè)I-TAC mRNA的表達(dá),應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TLR2、TLR4在N9表面的
2、表達(dá)。用尼龍毛分離純化小鼠原代T細(xì)胞,加I-TAC培養(yǎng),用ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中的IFN-Y和IL-4濃度。采用微孔隔離室遷移實(shí)驗(yàn)觀察I-TAC對(duì)T細(xì)胞的趨化作用。原代T細(xì)胞及N9細(xì)胞在I-TAC刺激下的增殖實(shí)驗(yàn)采用MTT法。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)黏附分子CDlla在T細(xì)胞表面的表達(dá)。 結(jié)果: 1、LPS與Aβ 42均能誘導(dǎo)的N9細(xì)胞表達(dá)I-TAC mRNA;TNF-α能顯著增加LPS誘導(dǎo)的I-TAC mRNA表達(dá),DEX
3、則降低其表達(dá)。 2、N9細(xì)胞在LPS刺激前后均可表達(dá)TLR2及TLR4膜分子。在細(xì)胞培養(yǎng)中加入抗-TLR4抗體,I-TAC的表達(dá)量顯著降低。 3、重組I-TAC對(duì)小鼠T細(xì)胞產(chǎn)生Th1型細(xì)胞因子IFN-γ的增加占顯著優(yōu)勢(shì)。在趨化實(shí)驗(yàn)中T細(xì)胞的遷移指數(shù)的增加呈I-TAC劑量依賴性,I-TAC濃度在200 ng/ml時(shí)遷移指數(shù)達(dá)4.964±1.398。在T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組相比,I-TAC使OD值顯著增高;但在N9細(xì)胞增
4、殖實(shí)驗(yàn)中I-TAC卻使OD值顯著下降。流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)顯示I-TAC以劑量依賴的形式顯著增加CDlla(LAF-1)陽(yáng)性T細(xì)胞的百分比。 結(jié)論: 1、LPS、TNF-α、Aβ42能夠誘導(dǎo)N9細(xì)胞表達(dá)I-TAC mRNA,其中TNF-α對(duì) LPS的誘導(dǎo)作用具有協(xié)同效應(yīng),而DEX則具有拮抗效應(yīng)。 2、LPS促進(jìn)N9細(xì)胞表面表達(dá)TLR2、TLR4。TLR4介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)可能是I-TAC表達(dá)的重要依賴因素。 3、
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