果糖-1,6-二磷酸酶在肝癌中的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的：
　　檢測(cè)果糖-1,6-二磷酸酶(FBP1)在肝癌中的表達(dá)，分析其與患者預(yù)后的關(guān)系。探討組蛋白去乙?；?HDAC)對(duì)FBP1缺失的調(diào)控機(jī)制，及FBP1對(duì)肝臟腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　方法：
　　通過(guò)免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)90例肝癌患者腫瘤組織及相應(yīng)的癌旁組織中FBP1的表達(dá)。采用配對(duì)秩和檢驗(yàn)比較肝癌組織與癌旁組織中 FBP1的表達(dá)水平，Kaplan-Meier法和Log-rank檢驗(yàn)分析FBP1表達(dá)水平與

2、患者生存期的關(guān)系。為進(jìn)一步探討肝癌中FBP1的調(diào)控機(jī)制采用HDAC抑制劑NaBu、SAHA、LBH按濃度梯度處理HepG2及SK-Hep1細(xì)胞，western blot及real-time PCR檢測(cè)FBP1蛋白及mRNA水平的變化。利用siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)敲除肝癌細(xì)胞株中HDAC1及HDAC2，并檢測(cè)其對(duì) FBP1表達(dá)的影響。染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè) HDAC與 FBP1的結(jié)合位點(diǎn)。90例臨床組織標(biāo)本同時(shí)經(jīng)免疫組化檢測(cè) FBP1、HDA

3、C1及 HDAC2，并分析其相關(guān)性。HepG2及SK-Hep1細(xì)胞經(jīng)病毒感染，分別構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)pcDNA3.1，pLenti6.3/FBP1，NS shRNA，F(xiàn)BP1 shRNA的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。葡萄糖檢測(cè)試劑盒檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞對(duì)葡萄糖消耗的變化。MTS檢測(cè)肝癌細(xì)胞株過(guò)表達(dá)FBP1對(duì)細(xì)胞增殖的影響。免疫缺陷小鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)FBP1過(guò)表達(dá)對(duì)腫瘤增殖的影響。
　　結(jié)果：
　　FBP1在肝癌組織中的表達(dá)明顯低于相應(yīng)的癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

4、意義(Z=7.952，P＜0.001)。小肝癌中FBP1的表達(dá)水平高于非小肝癌(P=0.005)。AJCC分期越高，F(xiàn)BP1表達(dá)越低(P=0.001)。FBP1高表達(dá)組患者平均生存期為50.17個(gè)月，低表達(dá)組患者平均生存期為34.88個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.034)。肝癌細(xì)胞株經(jīng)HDAC抑制劑NaBu、SAHA、LBH處理后，F(xiàn)BP1蛋白及mRNA水平明顯升高，并且具有藥物濃度依賴性。單獨(dú)干擾肝癌細(xì)胞株中HDAC1及HDAC2后

5、可上調(diào)FBP1的蛋白及mRNA水平，共同敲除HDAC1及HDAC2后FBP1上調(diào)更顯著。HDAC通過(guò)與FBP1增強(qiáng)子區(qū)AcH3K27位點(diǎn)結(jié)合，影響FBP1的轉(zhuǎn)錄。90例臨床標(biāo)本免疫組化檢測(cè)結(jié)果也提示FBP1與HDAC1及HDAC2的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.64，P＜0.05；r=-0.61，P＜0.05)?；謴?fù)肝癌細(xì)胞中FBP1的表達(dá)，可減低腫瘤細(xì)胞對(duì)葡萄糖的消耗，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，抑制腫瘤細(xì)胞在免疫缺陷小鼠皮下成瘤。
　　結(jié)論