細胞蠟塊技術(shù)在胸腔積液診斷中的應(yīng)用.pdf

1、目的：胸腔積液是晚期非小細胞肺癌(non-mall cell lung cancer， NSCLC)最易合并的臨床表現(xiàn)之一。分子靶向治療在晚期 NSCLC治療中的地位日益凸顯，2013年專家共識指出：對于NSCLC患者，建議有條件的單位同時行表皮生長因子受體（epithelial growth factor receptor，EGFR）基因突變、間變性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）和原癌基因1

2、（c-ros oncogene1 receptor，ROS-1）融合基因檢測。但是部分晚期肺癌患者由于體質(zhì)狀況、經(jīng)濟問題、患者及家屬意愿等原因，不能獲取組織病理，從而影響疾病診斷及組織分子分型，那么細胞病理標本，尤其是胸腔積液中的細胞標本能部分或全部代替組織標本，對疾病的診斷、惡性腫瘤的組織分型及進一步分子分型作出判斷，并指導(dǎo)治療。
　　然而，傳統(tǒng)的細胞學(xué)涂片技術(shù)普遍存在細胞堆積重疊、背景染色深而不易觀察、樣本無法長期保存等缺點，

3、將胸腔積液離心沉淀物制作成細胞蠟塊，行切片HE染色，免疫組織化學(xué)染色（immunohistochemistry，IHC），基因檢測等檢查，可能會彌補常規(guī)涂片檢查的不足。
　　本文收集了胸腔積液制作細胞蠟塊，并與常規(guī)胸腔積液細胞涂片比較，探討細胞蠟塊技術(shù)在胸腔積液診斷方面的作用，并為無法取得組織標本的肺癌患者，提供EGFR、ALK等基因檢測可行的新途徑。
　　方法：收集河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院（東院區(qū)）呼吸內(nèi)科2015年6月—20

4、16年2月合并有胸腔積液的患者共54例，記錄患者的性別、年齡、及胸腔積液部位、顏色、透明度、性質(zhì)。
　　均行常規(guī)細胞涂片HE染色（常規(guī)組），同期制作細胞蠟塊，并行切片HE染色（細胞蠟塊組），比較常規(guī)組與細胞蠟塊組切片中細胞數(shù)目、形態(tài)、染色背景等，并比較兩種方法診斷結(jié)果的一致性。
　　細胞蠟塊的制備步驟：
　　收集：留取新鮮胸腔積液約250ml,室溫下靜置30min；離心：棄上清液，留取底層液體約120ml，均勻置于12

5、個試管中離心，2000r/min，離心10min，（若沉淀量較少，可進行再次離心或多次離心）；固定：棄上清液，用吸管將沉淀物吸出，移入備好的潔凈小玻璃瓶中，加入10％中性緩沖福爾馬林固定液10倍于沉淀物的量，用吸管輕輕吹打沉淀物，以便充分固定，靜置、固定12h；脫水：棄去上清液，將細胞沉渣倒入折成漏斗形狀的擦鏡紙中，用吸水紙吸去多余液體，將擦鏡紙包好后放入70%的酒精中過夜，脫水12h,用鑷子取出，放置于吸水紙上吸干后，分別放入80%，

6、95%，100%酒精中濃度梯度脫水各1h；送檢：將經(jīng)過脫水后的包有細胞塊的紙包放入裝有新的10%中性緩沖福爾馬林固定液的小玻璃瓶中送病理科。
　　統(tǒng)計方法：全部數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0版統(tǒng)計軟件處理。
　　結(jié)果：
　　1研究對象的臨床特征
　　納入本研究的54例患者中，男性患者31例，占57.4%，女性患者23例，占42.6%；年齡分布范圍在31-82歲，平均年齡為63.0±11.3歲，年齡≥65歲的24例，占

7、44.4%，年齡<65歲的30例，占55.6%；血性胸腔積液12例，占22.2%，非血性胸腔積液42例,占77.8%；混濁胸腔積液44例，占81.5%，透明胸腔積液10例，占18.5%；左側(cè)胸腔積液26例，占48.1%，右側(cè)胸腔積液28例，占51.9%；滲出性胸腔積液49例，占90.7%，漏出性胸腔積液1例，占1.9%，介于滲漏之間的4例，占7.4%。
　　2細胞蠟塊制作成功率
　　共收集54例胸腔積液標本，其中44例成功制

8、作成細胞蠟塊，制作成功率為81.5%（44/54）。
　　3常規(guī)組和細胞蠟塊組鏡下特點及判讀結(jié)果
　　3.1鏡下特點
　　常規(guī)組顯示：涂片厚薄不均、染色背景濃厚、細胞重疊堆積、結(jié)構(gòu)不清。細胞蠟塊組顯示：染色背景干凈，染色對比清晰，細胞數(shù)目富集、厚薄均勻，且在多數(shù)病例中可觀察到細胞的排列方式及組織學(xué)結(jié)構(gòu)。
　　3.2判讀結(jié)果
　　3.2.1細胞蠟塊組未找到癌細胞的16例標本的診斷
　　常規(guī)組找到可疑癌細

9、胞1例，異型細胞的3例，這4例中細胞蠟塊組2例提示未見腫瘤細胞，2例可見少許退變異型細胞。1例胸腔積液病因診斷不明。有3例常規(guī)組及細胞蠟塊組均未找到癌細胞，組織病理診斷為小細胞癌。有3例常規(guī)組及細胞蠟塊組均可見淋巴細胞、漿細胞等成分，未見腫瘤細胞，臨床診斷為結(jié)核性胸膜炎。另外5例是常規(guī)組找到癌細胞，細胞蠟塊組為陰性。
　　3.2.2常規(guī)組與細胞蠟塊組的惡性胸腔積液檢出率比較
　　成功制備成細胞蠟塊的44例標本中，常規(guī)組有33

10、例診斷為惡性胸腔積液，11例未找到癌細胞；細胞蠟塊組有28例診斷為惡性胸腔積液，16例未找到癌細胞。細胞蠟塊組與常規(guī)組比較，診斷惡性胸腔積液的陽性一致率為84.8%，陰性一致率為100%，診斷準確度為88.6%。
　　兩組檢出惡性胸腔積液的結(jié)果比較，采用四格表資料的Fisher確切概率法，得出 P>0.05,結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義，可以認為常規(guī)組和細胞蠟塊組對于惡性胸腔積液的檢出率相同。
　　本實驗中有1例胸腔積液中找到肺來源的腺

11、癌細胞的細胞蠟塊標本行ALK（D5F3）免疫組化檢查，結(jié)果為（+++）。
　　結(jié)論:
　　1收集的54例胸腔積液標本，44例成功制成細胞蠟塊，成功率81.5%，此項技術(shù)操作簡單，耗材少，便于普及推廣，對胸腔積液病因的診斷有一定應(yīng)用價值。
　　2細胞蠟塊組與常規(guī)組惡性胸腔積液診斷一致性好，表明細胞蠟塊技術(shù)能代替常規(guī)胸腔積液涂片檢查，可推薦為胸腔積液診斷的另一種方法。
　　3細胞蠟塊切片顯微鏡下觀察顯示細胞數(shù)多，且細