姜黃素通過調(diào)節(jié)組蛋白乙?；竝300對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠認(rèn)知功能的影響.pdf

1、目的和意義
　　隨著社會(huì)人口老齡化進(jìn)程的加劇，阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)已成為老年癡呆病中最常見的類型，它是一種以進(jìn)行性認(rèn)知障礙和記憶力減退為主要臨床特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。至今，AD病因不明確，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，尚無有效的治療方法。以表觀遺傳學(xué)為基礎(chǔ)的療法已成為當(dāng)前AD治療的研究熱點(diǎn)。姜黃素是組蛋白乙?；竝300的特異性抑制劑，在治療AD的表觀遺傳學(xué)機(jī)制方面未見報(bào)道。因此，本課題通過構(gòu)建AD大鼠

2、模型，探討姜黃素通過調(diào)節(jié)組蛋白乙酰化酶p300對(duì)AD認(rèn)知功能的影響。
　　材料和方法
　　采用Morris水迷宮篩選出平均逃避潛伏期（average escape latency，AEL）穩(wěn)定的二級(jí)雄性Wistar大鼠45只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、A D模型組、姜黃素給藥組，每組15只。采用D-半乳糖腹腔注射聯(lián)合Aβ25-35海馬立體定位的方法進(jìn)行造模。用二甲基亞砜（DMSO）和生理鹽水將姜黃素溶解成50mg/ml，姜黃素給藥組

3、大鼠以4ml/kg腹腔注射，每天1次；假手術(shù)組大鼠和A D模型組大鼠注射等體積的DMSO和生理鹽水。治療28d后，每組隨機(jī)選取8只大鼠進(jìn)行Morris水迷宮測試大鼠的認(rèn)知功能；剩余6只大鼠用lml注射器經(jīng)枕骨大孔由延髓池抽取腦脊液（cerebrospinal fluid，CSF），采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測CSF中Aβ1-42和tau蛋白的濃度；已抽取CSF的大鼠立刻斷頭取腦，采用光學(xué)顯微鏡觀察大鼠海馬組織結(jié)構(gòu)；采用免疫組織

4、化學(xué)觀察大鼠海馬APP和tau蛋白的表達(dá)；采用蛋白免疫印跡法（Western blot，WB）檢測組蛋白H3乙?；男揎椝剑徊捎肊LISA試劑盒檢測組蛋白乙?；傅幕钚?；采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（Real time PCR，RT-PCR）檢測p300，APP，BACE1的mRNA水平。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1.姜黃素對(duì)AD模型大鼠的認(rèn)知功能的影響
　　與假手術(shù)組大鼠相比，AD模型組大鼠的AEL延長（P<0.05，P<0

5、.01）、目標(biāo)象限停留的時(shí)間短（P<0.01）、穿越平臺(tái)的次數(shù)減少（P<0.01）；與AD模型組大鼠相比，姜黃素給藥組大鼠的AEL縮短（P<0.05，P<0.01），目標(biāo)象限停留的時(shí)間長（P<0.01），穿越平臺(tái)的次數(shù)增多（P<0.05）。
　　2.姜黃素對(duì)AD模型大鼠海馬組織結(jié)構(gòu)的影響
　　與假手術(shù)組大鼠相比，AD模型組大鼠海馬CA3和DG區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞部分固縮、深染，血管間隙增寬，細(xì)胞水腫明顯；與AD模型組大鼠相比，姜黃素

6、給藥組大鼠海馬CA3和DG區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞固縮、深染少，血管間隙窄，細(xì)胞水腫減輕。
　　3.姜黃素對(duì)AD模型大鼠海馬神經(jīng)元APP和tau蛋白的影響
　　與假手術(shù)組大鼠相比，AD模型組大鼠海馬 CA3區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞 APP和tau蛋白的平均光密度值升高（p<0.01）；與AD模型組大鼠相比，姜黃素給藥組大鼠的CA3區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞APP和tau蛋白的平均光密度值降低（p<0.01，p<0.05）。
　　4.姜黃素對(duì)AD模型大鼠腦脊

7、液中Aβ1-42和tau蛋白濃度的影響
　　與假手術(shù)組大鼠相比，AD模型大鼠腦脊液中 Aβ1-42的濃度明顯降低（P<0.01）、tau蛋白的濃度明顯升高（P<0.01）；與AD模型組大鼠相比，姜黃素給藥組大鼠的腦脊液中Aβ1-42濃度顯著升高（P<0.01）、tau蛋白的濃度顯著降低（P<0.01）。
　　5.姜黃素對(duì) AD模型大鼠海馬組蛋白乙?；揎椝胶徒M蛋白乙?；富钚缘挠绊?br>　　與假手術(shù)組大鼠相比，AD模型組

8、大鼠海馬組蛋白H3高乙?；M蛋白乙?；傅幕钚砸苍鰪?qiáng)（p<0.01）；與AD模型組大鼠相比，姜黃素給藥組大鼠的海馬組蛋白H3低乙?；M蛋白乙?；富钚詼p弱（p<0.01）。
　　6.姜黃素對(duì)AD模型大鼠海馬p300、APP、BACE1的mRNA水平的影響
　　與假手術(shù)組大鼠相比，AD模型組大鼠海馬p300、APP和BACE1的mRNA水平增高（p<0.01）；與AD模型組大鼠相比，姜黃素給藥組大鼠的海馬p300、APP和