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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.明確心肌梗死小鼠的外周血以及梗死心肌部位髓源性抑制細(xì)胞浸潤(rùn)增加;發(fā)現(xiàn)了糖基化終產(chǎn)物能增加小鼠外周血以及梗死心肌區(qū)域的髓源性抑制細(xì)胞的浸潤(rùn);初步證實(shí)糖基化終產(chǎn)物通過(guò)髓源性抑制細(xì)胞加重心肌梗死小鼠的心肌損傷,并探索可能的機(jī)制;為糖尿病合并心梗患者心肌梗死加重的原因提供進(jìn)一步的臨床理論基礎(chǔ)。
方法:
1.選擇雄性20-25g C57 BL/6J小鼠,分為四組:假手術(shù)組小鼠、假手術(shù)+AGEs組、急性心肌
2、梗死組、急性心肌梗死+AGEs組。術(shù)前,假手術(shù)+AGEs組和急性心肌梗死+AGEs組小鼠給予腹腔注射AGEs25 mg/kg/d,每天一次,連續(xù)三天;假手術(shù)組和急性心肌梗死組小鼠各給予同等體積的0.9%的生理鹽水腹腔注射,每天一次,連續(xù)三天。在氣管插管使用呼吸機(jī)的情況下,假手術(shù)小鼠開(kāi)胸后在冠狀動(dòng)脈前降支處穿線(xiàn)但不結(jié)扎,手術(shù)小鼠結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支且肉眼可見(jiàn)結(jié)扎區(qū)域以下心肌缺血變白。術(shù)后12小時(shí)對(duì)小鼠心臟行M超檢查,再次明確造模是否成功。<
3、br> 2.術(shù)后24小時(shí)處死小鼠,收集小鼠的骨髓、脾臟、血液、心臟。取小鼠的心臟,給予HE染色、免疫組化、免疫熒光、細(xì)胞凋亡檢測(cè);取小鼠的血液、脾臟、骨髓流式檢測(cè)CD11b+Gr-1+細(xì)胞;心肌組織提取RNA,用RT-PCR檢測(cè)CD11b+,Ly6G+,炎癥因子IL-6,iNOS的基因表達(dá);通過(guò)定量RT-PCR檢測(cè)CD11b+Gr-1+、CD11b+Gr-1-細(xì)胞中RAGE(AGEs受體)mRNA的表達(dá)。
3.提取小鼠骨髓的
4、CD11b+Gr-1+細(xì)胞,用不同濃度的AGEs刺激24小時(shí)后觀察細(xì)胞的形態(tài),并收集細(xì)胞培養(yǎng)液用Elisa法檢測(cè)炎癥因子IL-6、TNF-α的變化。
結(jié)果:
1. AMI后24小時(shí),通過(guò)免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)心肌梗死小鼠較假手術(shù)小鼠的心肌組織髓源性抑制細(xì)胞CD11b+Gr-1+數(shù)量顯著增加;通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)外周血中髓源性抑制細(xì)胞CD11b+Gr-1+百分比增加,脾臟中CD11b+Gr-1+百分比減少,骨髓中CD11b+G
5、r-1+無(wú)明顯改變;在梗死的心肌中CD11b和Ly6G基因表達(dá)上調(diào)。免疫組化進(jìn)一步證實(shí)心肌梗死區(qū)域的CD11b+細(xì)胞數(shù)量增加。
2.腹腔注射AGEs后,心肌梗死小鼠的血液中CD11b+Gr-1+的百分比進(jìn)一步增加,心肌梗死及邊緣區(qū)域的CD11b+細(xì)胞數(shù)量明顯增加;假手術(shù)組小鼠加入AGEs后檢測(cè)到CD11b+Gr-1+、CD11b+Gr-1-細(xì)胞表面的AGEs受體(RAGE)增加,提示AGEs可能通過(guò)RAGE來(lái)調(diào)節(jié)髓源性抑制細(xì)胞
6、的浸潤(rùn)。
3. AGEs+心肌梗死組小鼠的心梗面積增加,射血功能減低,心肌細(xì)胞凋亡加劇。與結(jié)果2結(jié)合考慮,提示AGEs可能通過(guò)髓源性抑制細(xì)胞加重了心肌梗死小鼠的心肌損傷。
4.加入AGEs后心肌部位的炎癥因子IL-6和iNOS進(jìn)一步增加,此結(jié)果與髓源性抑制細(xì)胞的變化相一致。
5.體外實(shí)驗(yàn)中AGEs刺激骨髓分離的CD11b+Gr-1+細(xì)胞后,炎癥因子IL-6、TNF-α分泌增多,且在顯微鏡下觀察到受刺激的CD
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