AGEs加劇MDSCs對AMI小鼠心肌損傷的研究.pdf

1、目的：
　　1.明確心肌梗死小鼠的外周血以及梗死心肌部位髓源性抑制細胞浸潤增加；發(fā)現(xiàn)了糖基化終產(chǎn)物能增加小鼠外周血以及梗死心肌區(qū)域的髓源性抑制細胞的浸潤；初步證實糖基化終產(chǎn)物通過髓源性抑制細胞加重心肌梗死小鼠的心肌損傷，并探索可能的機制；為糖尿病合并心梗患者心肌梗死加重的原因提供進一步的臨床理論基礎。
　　方法：
　　1.選擇雄性20-25g C57 BL/6J小鼠，分為四組：假手術組小鼠、假手術+AGEs組、急性心肌

2、梗死組、急性心肌梗死+AGEs組。術前，假手術+AGEs組和急性心肌梗死+AGEs組小鼠給予腹腔注射AGEs25 mg/kg/d，每天一次，連續(xù)三天；假手術組和急性心肌梗死組小鼠各給予同等體積的0.9％的生理鹽水腹腔注射，每天一次，連續(xù)三天。在氣管插管使用呼吸機的情況下，假手術小鼠開胸后在冠狀動脈前降支處穿線但不結扎，手術小鼠結扎冠狀動脈前降支且肉眼可見結扎區(qū)域以下心肌缺血變白。術后12小時對小鼠心臟行M超檢查，再次明確造模是否成功。<

3、br>　　2.術后24小時處死小鼠，收集小鼠的骨髓、脾臟、血液、心臟。取小鼠的心臟，給予HE染色、免疫組化、免疫熒光、細胞凋亡檢測；取小鼠的血液、脾臟、骨髓流式檢測CD11b+Gr-1+細胞；心肌組織提取RNA，用RT-PCR檢測CD11b+，Ly6G+，炎癥因子IL-6，iNOS的基因表達；通過定量RT-PCR檢測CD11b+Gr-1+、CD11b+Gr-1-細胞中RAGE（AGEs受體）mRNA的表達。
　　3.提取小鼠骨髓的

4、CD11b+Gr-1+細胞，用不同濃度的AGEs刺激24小時后觀察細胞的形態(tài)，并收集細胞培養(yǎng)液用Elisa法檢測炎癥因子IL-6、TNF-α的變化。
　　結果：
　　1. AMI后24小時，通過免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)心肌梗死小鼠較假手術小鼠的心肌組織髓源性抑制細胞CD11b+Gr-1+數(shù)量顯著增加；通過流式細胞術發(fā)現(xiàn)外周血中髓源性抑制細胞CD11b+Gr-1+百分比增加，脾臟中CD11b+Gr-1+百分比減少，骨髓中CD11b+G

5、r-1+無明顯改變；在梗死的心肌中CD11b和Ly6G基因表達上調(diào)。免疫組化進一步證實心肌梗死區(qū)域的CD11b+細胞數(shù)量增加。
　　2.腹腔注射AGEs后，心肌梗死小鼠的血液中CD11b+Gr-1+的百分比進一步增加，心肌梗死及邊緣區(qū)域的CD11b+細胞數(shù)量明顯增加；假手術組小鼠加入AGEs后檢測到CD11b+Gr-1+、CD11b+Gr-1-細胞表面的AGEs受體（RAGE）增加，提示AGEs可能通過RAGE來調(diào)節(jié)髓源性抑制細胞

6、的浸潤。
　　3. AGEs+心肌梗死組小鼠的心梗面積增加，射血功能減低，心肌細胞凋亡加劇。與結果2結合考慮，提示AGEs可能通過髓源性抑制細胞加重了心肌梗死小鼠的心肌損傷。
　　4.加入AGEs后心肌部位的炎癥因子IL-6和iNOS進一步增加，此結果與髓源性抑制細胞的變化相一致。
　　5.體外實驗中AGEs刺激骨髓分離的CD11b+Gr-1+細胞后，炎癥因子IL-6、TNF-α分泌增多，且在顯微鏡下觀察到受刺激的CD