微波RNA-214對膿毒癥小鼠心肌損傷的作用.pdf

1、目的:膿毒癥的高發(fā)病率及病死率使其成為嚴峻的世界性醫(yī)學問題。膿毒癥由病原微生物感染誘發(fā)全身炎癥反應，繼而發(fā)生漸進器官功能障礙，其中以心血管系統(tǒng)為著。研究表明，約有40％-50％的膿毒癥患者具有心肌損傷，其病死率高達70％-90％，而不具有心肌損傷的病死率率遠遠減低，為20％。盡管已經(jīng)對其診斷和治療方法進行了大量研究，但對其有效治療仍具有挑戰(zhàn)性。因此，為減少膿毒癥患者的發(fā)病率和病死率，對治療心肌損傷為目標的新的治療策略有迫切的需求。

2、>　　迄今為止，多種微小RNA(miRNA)已被證實在膿毒癥中表達異常，對其診斷及預后提供參考價值。而且研究證實，miRNA與多種心臟疾病相關，其中，miRNA-21在缺血性心臟病中保護心臟功能扮演著重要角色，miRNA-494對缺血再灌注心肌損傷也具有保護作用， miRNA-214，已被證實可保護氧化應激誘導的心肌細胞損傷。然而目前對miRNA-214與膿毒癥誘導的心肌損傷是否相關還不清楚。由于心肌損傷是膿毒癥死亡的主要原因，因此我們

3、應著眼于確定miRNA-214表達與膿毒癥誘導的心肌損傷是否相關及對其作用。
　　方法:
　　1、采用盲腸結扎穿孔術(CLP)制備小鼠膿毒癥模型，隨機分為6組:假手術組、CLP組、miRNA-214前體空白對照組、miRNA-214抑制劑空白對照組、miRNA-214前體組、miRNA-214抑制劑組，分別于術后6h、12h、24 h采用實時熒光定量聚合酶鏈反應法(RT-PCR)檢測假手術組和CLP組心肌組織miRNA-21

4、4表達情況，觀察術后24 h假手術組和CLP組心肌組織病理改變確定模型建立成功，并選定術后12 h采用RT-PCR法檢測各組心肌組織miRNA-214表達情況。
　　2、采用盲腸結扎穿孔術(CLP)制備小鼠膿毒癥模型，隨機分為4組:假手術組、CLP組、miRNA-214前體+CLP組、miRNA-214抑制劑+CLP組，分別于術后12h、24 h采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定各組心肌組織上清液腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素-

5、6(IL-6)、白介素-10(IL-10)水平及血清肌鈣蛋白(cTnⅠ)、腦鈉肽(BNP)水平，于術后24 h采用流式細胞技術測定心肌細胞凋亡率，光鏡下觀察心肌組織病理學結果。
　　結果:
　　1、CLP對小鼠一般狀況及病理改變的影響
　　假手術組及CLP組小鼠于麻醉手術后3-6 h清醒，假手術組小鼠均可正常飲水、進食，CLP組小鼠清醒后精神萎靡，反應差，活動少，豎毛，寒戰(zhàn)，不飲水，食欲低下，眼角分泌物增多，隨時間延長

6、病態(tài)逐漸明顯;假手術組中小鼠心肌組織未見明顯病理改變，CLP組中心肌細胞可見空泡變性，心肌壞死，心肌纖維腫脹，間質水腫。
　　2、miRNA-214在CLP小鼠心肌組織中的表達上調
　　與假手術組比較，CLP組miRNA-214的表達水平上調;CLP術后6h、12h、24 h miRNA-214表達分別是對應時相假手術組miR-214表達的2.28倍、1.89倍、1.53倍（P均＜0.05）。說明膿毒癥時伴有miRNA-21

7、4異常表達。
　　3、miRNA-214轉染情況
　　與CLP組術后12h比較，轉染miRNA-214前體后miRNA-214表達是CLP組miRNA-214表達的1.86倍，而轉染miRNA-214抑制劑后miR-214表達則是CLP組的15.5％(P＜0.05);miRNA-214對照組miRNA-214表達與及假手術組無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。說明miRNA-214轉染成功，且轉染本身對miRNA-214表達無影響

8、。
　　4、miRNA-214對膿毒癥誘導的心肌損傷具有保護作用
　　轉染miRNA-214前體的CLP小鼠與CLP組小鼠相比，心肌組織上清液中促炎因子水平降低，抗炎因子水平升高，心肌損傷標記物cTnⅠ水平降低，心衰指標BNP水平降低，心肌細胞凋亡率降低，心肌組織形態(tài)學結果也顯示病理改變減輕;而轉染抑制劑組的CLP小鼠心肌組織上清液中促炎因子水平升高，抗炎因子水平降低，心肌損傷標記物cTnⅠ水平升高，心衰指標BNP水平升高，

9、心肌細胞凋亡率升高，心肌組織形態(tài)學結果也顯示病理改變較CLP組加重，提示miRNA-214對膿毒癥誘導的心肌損傷具有保護作用。
　　結論:
　　1、CLP對小鼠一般狀況及心肌組織形態(tài)學均有影響，提示應用CLP建立膿毒癥心肌損傷模型成功。
　　2、膿毒癥誘導的心肌損傷中miRNA-214表達異常，在膿毒癥誘導的受損心肌中miRNA-214表達增加。
　　3、miRNA-214對膿毒癥誘導的心肌損傷具有保護作用。過表