LncRNAs在膿毒癥急性腎損傷的作用.pdf

1、目的：⑴對在膿毒癥急性腎損傷患者外周血中差異性表達lncRNAs進行生物信息學分析，以探討外周血lncRNAs在膿毒癥急性腎損傷發(fā)病中的作用。⑵探討KIM-1、NGAL及IL-6對早期鑒別診斷不同病原菌血流感染的膿毒癥急性腎損傷的價值。⑶檢測miR-4321和miR-4270表達水平在膿毒性AKI不同時間點變化。
　　方法：①選取3例膿毒癥急性腎損傷患者和3例健康志愿者為研究對象，采用lncRNA芯片篩查差異表達的lncRNAs，

2、對目標lncRNAs進行生物信息學分析。②清潔級SD雄性大鼠，尾靜脈注射大腸埃希菌標準菌株懸液，金黃色葡萄球菌標準菌株懸液（濃度為1.5×108CFU/mL,注射量為0.1mL/100g），制備不同病原菌血流感染的膿毒癥急性腎損傷模型。大鼠隨機分為3組：正常對照組（Control組，15只），大腸埃希菌組（E.coli組，15只)，金黃色葡萄球菌組(SA組，15只)。實驗組均按照6h、12h、24h、48h、72h時間點隨機分為5個亞組

3、。收集血液和腎臟組織，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法檢測血清肌酐（SCr）、血清尿素氮（BUN）、血KIM-1、NGAL、IL-6；免疫組化法檢測5個時間點3組動物腎臟病理組織形態(tài)學變化。③在大腸埃希菌組RT-PCR法檢測腎組織miR-4321和miR-4270表達量。
　　結果：⑴芯片篩查結果提示lncRNAs在膿毒癥急性腎損傷患者中出現(xiàn)差異性表達，最終確定30,586個差異表達的lncRNAs和26,109個差異表達的

4、mRNA（≥2倍的變化）。其中，與對照組比較，5361個上調和5928個下調差異性表達的lncRNAs。通過基因本體論（GO）和KEGG通路分析。GO分析表明差異表達的lncRNAs與細胞分化、免疫系統(tǒng)的發(fā)展、Toll樣受體4信號傳導途徑、炎性反應、Wnt信號受體信號途徑等相關聯(lián)。KEGG信號通路表明，上調的lncRNAs對應33條通路而下調的lncRNAs對應17條通路。途徑分析顯示，MAPK信號通路、NF-κB信號途徑，TGF-β的

5、信號傳導途徑，PI3K-Akt信號傳導途徑，Wnt信號通路，鈣離子信號通路途徑等炎癥反應顯著富集。⑵ELISA結果檢測顯示，大腸埃希菌組、金黃色葡萄球菌組血KIM-1、NGAL、IL-6水平6h已達高峰，6h、12h、24h、48h都明顯高于正常對照組(p<0.01)。大腸埃希菌組血清KIM-1、NGAL、IL-6水平6h、12h、24h、48h均較金黃色葡萄球菌組明顯增高(p<0.05)。而血清BUN、Scr值12h明顯上升，48h達

6、高峰，比血KIM-1、NGAL升高時間延后。腎組織病理切片結果提示金黃色葡萄球菌組12h、24h、48h大鼠腎間質充血程度、腎小管擴張程度均較大腸埃希菌組有所減輕。⑶大腸埃希菌組miR-4321和miR-4270表達水平在注射6h后下降，24 h達到高峰，在48 h表達水平相比24 h表達水平降低。隨著疾病時間的延長，miR-4321和miR-4270的水平顯著高于在6h、12 h、24h、48h表達水平（P<0.05）。
　　結