低分子肝素對(duì)膿毒癥誘導(dǎo)大鼠急性腎損傷的保護(hù)作用.pdf

1、[目的]
　　 膿毒癥以及膿毒癥引起的靶器官損害病死率高達(dá)50％-90％，成為危重病急救醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。腎臟是最常受累的器官之一，急性腎損傷(AKI)已被公認(rèn)為預(yù)測(cè)患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，死亡率高達(dá)74.5％，其機(jī)制不完全清楚?；罨鞍證在膿毒癥上的成功應(yīng)用，使抗凝劑在膿毒癥及其誘導(dǎo)的靶器官損傷中的保護(hù)作用得到了普遍的認(rèn)同，因而推動(dòng)了像肝素這樣具有抗炎和抗凝雙重作用的藥物研究。高遷移率族蛋白B1(HMGB1)作為膿毒癥

2、晚期重要炎性介質(zhì)之一，不但具有促炎作用，而且還有明顯的促凝效應(yīng)，被證實(shí)在膿毒癥的發(fā)展、轉(zhuǎn)歸及預(yù)后方面扮演著重要角色。為研究膿毒癥腎損傷的機(jī)制以及尋求膿毒癥器官損傷的保護(hù)方法，本研究觀察了低分子肝素(LMWH)對(duì)膿毒癥大鼠腎臟HMGB1、血漿腎損傷分子1(KIM-1)、血清肌酐等指標(biāo)的影響，探討低分子肝素對(duì)膿毒癥大鼠腎損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。
　　 [方法]
　　 采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)制作大鼠膿毒癥模型。將120只健

3、康雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、CLP組、實(shí)驗(yàn)組(低分子肝素組)，每組40只：①假手術(shù)組(n=40)：無(wú)菌狀態(tài)下開(kāi)腹尋找到盲腸后輕拉，再將其還納腹腔，然后逐層關(guān)腹，術(shù)后立即腹腔注射生理鹽水(NS)2mL及頭孢曲松(30mg/kg)，每12h重復(fù)1次；②CLP組(n=40)：CLP后立即腹腔注射生理鹽水2ml及頭孢曲松(30mg/kg)，每12h重復(fù)1次；③低分子肝素治療組(實(shí)驗(yàn)組n=40)：CLP后立即腹腔注射低分子肝素鈉注射液(150

4、 U/kg)、生理鹽水2ml及頭孢曲松(30mg/kg)，每12h重復(fù)1次。以術(shù)后3h、6h、12h、24h、48h為觀察點(diǎn)，觀察大鼠術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)活動(dòng)、進(jìn)食、呼吸，豎毛、腹瀉、眼球凹陷、尿量等情況，于術(shù)后3h、6h、12h、24h、48 h隨機(jī)處死大鼠：采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法和Western blot法檢測(cè)腎組織中HMGB1基因和蛋白的表達(dá)水平，采用夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)血漿KIM-1水平，生化法檢測(cè)

5、血清肌酐水平，同步記錄膿毒癥嚴(yán)重程度評(píng)分和半數(shù)生存時(shí)間。
　　 [結(jié)果]
　　 1.實(shí)驗(yàn)組術(shù)后12 h、24 h、48 h各時(shí)段的膿毒癥評(píng)分顯著低于同期CLP組(P＜0.05)，顯著高于同期假手術(shù)組(P＜0.05)；半數(shù)生存時(shí)間顯著高于同期CLP組(P＜0.05)，顯著低于同期假手術(shù)組(P＜0.05)。
　　 2.CLP組術(shù)后6 h、12 h、24 h、48 h各時(shí)段的HMGB1 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著高于同

6、期假手術(shù)組、實(shí)驗(yàn)組和本組3 h時(shí)段(P＜0.05)；實(shí)驗(yàn)組12 h、24 h、48 h各時(shí)段腎組織的HMGB1 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著低于同期CLP組(P＜0.05)，顯著高于同期假手術(shù)組(P＜0.05)。
　　 3.CLP組術(shù)后6 h、12 h、24 h、48 h各時(shí)段的血漿KIM-1水平顯著高于同期假手術(shù)組、實(shí)驗(yàn)組和本組3h時(shí)段(P＜0.05)；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后6 h、12 h、24 h、48 h各時(shí)段的血漿KIM-1水平顯著

7、高于同期假手術(shù)組(P＜0.05)，顯著低于同期CLP組(P＜0.05)。
　　 4.CLP組術(shù)后24 h、48 h各時(shí)段的血清肌酐水平顯著高于同期假手術(shù)組、實(shí)驗(yàn)組和本組3 h時(shí)段(P＜0.05)；實(shí)驗(yàn)組各時(shí)段血清肌酐水平與同期假手術(shù)組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，24 h、48 h各時(shí)段的血清肌酐水平顯著低于同期CLP組(P＜0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.膿毒癥大鼠的腎HMGB1基因、蛋白表達(dá)水平