智能納米微載體負(fù)載血小板衍生生長(zhǎng)因子C防治靜脈血栓形成的初步研究.pdf

1、目的:(1)觀察血小板衍生生長(zhǎng)因子C(platelet-derived growth factor-C，PDGF-C)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及間充質(zhì)干細(xì)胞的影響;(2)制備具有靶向抗凝負(fù)載PDGF-C的納米微載體;(3)驗(yàn)證靶向抗凝納米微載體負(fù)載PDGF-C對(duì)血管內(nèi)皮損傷修復(fù)的治療作用。
　　方法:(1)體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并進(jìn)行鑒定，不同濃度梯度的PDGF-C干預(yù)，觀察對(duì)兩種細(xì)胞增殖能力及遷移能力的影響。MTT法繪制生

2、長(zhǎng)曲線，比較細(xì)胞增殖能力;流式檢測(cè)細(xì)胞周期;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)比較對(duì)細(xì)胞遷移能力影響。(2)雙乳相法合成納米殼聚糖微載體，磺化反應(yīng)合成磺酸化殼聚糖微載體，利用微載體吸附PDGF-C及肌球蛋白4抗體。通過透射電鏡描述其形態(tài)特征，紅外光譜及體外抗凝試驗(yàn)對(duì)其理化特征進(jìn)行描述，采用溶血實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)其生物安全性。(3)機(jī)械夾閉小鼠腎靜脈下段下腔靜脈建立內(nèi)皮損傷模型，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分三組，均在1、2、3天給藥并給予肝素

3、抗凝治療防止血栓形成，給藥后第1、3、7天取出損傷段下腔靜脈，HE染色及vWF免疫熒光染色觀察血管損傷及修復(fù)情況;活體伊文氏藍(lán)染料(Evans blue)染色損傷的下腔靜脈，采用Lucia軟件計(jì)算染色血管和總血管面積，計(jì)算再內(nèi)皮化程度。
　　結(jié)果:(1)PDGF-C能明顯刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖，增加兩種細(xì)胞S期細(xì)胞的比例，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖成劑量依賴關(guān)系，對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的促增殖作用在20ng/ml達(dá)高峰。同時(shí)，PDG

4、F-C增強(qiáng)了內(nèi)皮細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移能力，對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞遷移作用強(qiáng)于血管內(nèi)皮細(xì)胞;(2)掃描電鏡顯示微載體藥物具有良好的形態(tài)結(jié)構(gòu)，粒徑大小50-100nm;紅外圖譜提示存在磺化取代;微載體對(duì)PDGF-C包封率為54.42％，載藥率為20.33％;微載體體外72小時(shí)緩釋PDGF-C累計(jì)釋放率82.25％;體外凝血實(shí)驗(yàn)表明藥物微載體具有顯著抗凝血作用(P＜0.05)，抗凝血效果呈劑量效應(yīng)關(guān)系，當(dāng)濃度為50mg/ml時(shí)其抗凝血效果與肝

5、素相比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P≥0.05）;溶血實(shí)驗(yàn)顯示，樣品濃度為10mg/ml、30mg/ml、50mg/ml時(shí)，溶血率分別為0.81％、1.08％、1.21％，符合國(guó)標(biāo)關(guān)于溶血率小于5％的安全標(biāo)準(zhǔn);細(xì)胞毒性試驗(yàn)，微載體藥物濃度為10mg/ml時(shí)，細(xì)胞毒性級(jí)別為0級(jí)，濃度為30mg/ml、50mg/ml時(shí)，細(xì)胞毒性級(jí)別為1級(jí)，表明凝血微載體藥物的浸提液無明顯的細(xì)胞毒性;(3)微載體藥物移植后，血管內(nèi)皮修復(fù)速度明顯增加，7d修復(fù)率達(dá)到9