基于適配體的酶聯(lián)吸光度法檢測(cè)血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB.pdf

1、第一章:對(duì)核酸適配體的定義、篩選過(guò)程和優(yōu)點(diǎn)以及血小板衍生生長(zhǎng)因子的結(jié)構(gòu)和作用進(jìn)行了簡(jiǎn)單的介紹，在此基礎(chǔ)上對(duì)基于適配體的血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB的不同檢測(cè)方法進(jìn)行了綜述；并對(duì)本論文的立題背景、研究?jī)?nèi)容以及創(chuàng)新點(diǎn)進(jìn)行了闡述。
　　第二章:本章發(fā)展了一種基于抗體和適配體的酶聯(lián)吸光度法檢測(cè)血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB。在修飾有抗體的微孔板中加入分析物血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB，則抗體能夠?qū)⑵涮禺愋圆东@。然后加入生物素標(biāo)記的適配體，適配體與血小板

2、衍生生長(zhǎng)因子-BB結(jié)合，從而形成三明治結(jié)構(gòu)。再加入酶標(biāo)抗體工作液，則通過(guò)生物素和鏈霉親和素之間的相互作用，適配體可以與酶分子結(jié)合。加入酶的底物，進(jìn)行酶催化反應(yīng)。通過(guò)測(cè)定酶催化產(chǎn)物的吸光度值從而實(shí)現(xiàn)血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB的定量檢測(cè)。該方法當(dāng)血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB的濃度為2.5pM-40pM時(shí)與吸光度值具有較好的相關(guān)性，線(xiàn)性方程為y=0.056 x-3.14×10-4(R2=0.9992)。該方法操作簡(jiǎn)單，靈敏度較高，具有較好的選擇性和

3、較高的回收率。
　　第三章:本章建立了一種基于雙適配體的酶聯(lián)吸光度法檢測(cè)血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB。在鏈霉親和素包被的微孔板中加入生物素標(biāo)記的適配體，通過(guò)生物素和鏈霉親和素之間的相互作用，使適配體修飾于微孔板中。當(dāng)加入血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB，適配體可以特異地將其捕獲。再次加入生物素標(biāo)記的適配體，則其可以與血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB結(jié)合，從而形成三明治結(jié)構(gòu)。再加入酶標(biāo)抗體工作液，通過(guò)生物素和鏈霉親和素間的相互作用，酶分子可以與適配體結(jié)

4、合。加入酶底物，進(jìn)行酶催化反應(yīng)。通過(guò)測(cè)定催化產(chǎn)物的吸光度值實(shí)現(xiàn)對(duì)血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB的定量檢測(cè)。當(dāng)血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB濃度在12.5pM-400 pM范圍內(nèi)時(shí)與吸光度值具有較好的相關(guān)性，線(xiàn)性方程為：y=0.005 x+0.03(R2=0.998)，檢測(cè)限約為5.8 pM。而且該方法可以實(shí)現(xiàn)在稀釋的牛血清復(fù)雜樣品中對(duì)血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB的檢測(cè)。
　　第四章:結(jié)合適配體和滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，我們發(fā)展了一種靈敏地檢測(cè)血小板衍

5、生生長(zhǎng)因子-BB的方法。首先，血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB被修飾于微孔板中的抗體特異性捕獲，然后與連接引物序列的適配體結(jié)合，從而形成三明治結(jié)構(gòu)。通過(guò)滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)，引物序列可以延長(zhǎng)形成長(zhǎng)的具有重復(fù)序列的的單鏈DNA，該產(chǎn)物可以結(jié)合大量的生物素標(biāo)記的短鏈DNA探針，然后與標(biāo)記有鏈霉親和素的辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合，它可以催化底物轉(zhuǎn)化成有顏色的產(chǎn)物，通過(guò)吸光度分析對(duì)血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB進(jìn)行檢測(cè)。由于結(jié)合了滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和辣根過(guò)氧化物酶催化法，實(shí)現(xiàn)了靈