血小板衍生生長(zhǎng)因子在人肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景與目的：
　　 血小板衍生生長(zhǎng)因子（platelet-derived growth factor，PDGF）及其受體PDGFR（platelet-derived growth factor receptor）在多種人類腫瘤中表達(dá)，參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展，因此日益引起關(guān)注。本文旨在研究PDGF及PDGFR在人肝癌HepG2細(xì)胞中的表達(dá)情況及其對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的作用。在此基礎(chǔ)上，觀察大黃素對(duì)HepG2細(xì)胞體外增殖的影響并探討其與PD

2、GF作用的相關(guān)機(jī)制。從而為抗腫瘤治療提供有用的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1. 體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細(xì)胞，用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞中PDGF及PDGFR的表達(dá)并予分型。
　　 2. 經(jīng)外源性PDGF-A、PDGF-B細(xì)胞因子（0－20ng/mL）作用培養(yǎng)細(xì)胞后，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性；流式細(xì)胞儀（FCM）檢測(cè)細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡；免疫組織化學(xué)半定量分析NF-κB和PDGFR表達(dá)情況；電鏡觀察細(xì)胞超

3、微結(jié)構(gòu)變化。
　　 3. 體外培養(yǎng)HepG2細(xì)胞，經(jīng)不同濃度PDGF或PDGF與大黃素共同作用。實(shí)驗(yàn)分組：⑴對(duì)照組；⑵PDGF-A（1.25ng/mL）處理組；⑶PDGF-A（2.5ng/mL）處理組；⑷PDGF-A（5.0ng/mL）處理組；⑸PDGF-A（10ng/mL）處理組；⑹PDGF-A（20ng/mL）處理組；⑺PDGF-B（1.25ng/mL）處理組；⑻PDGF-B（2.5ng/mL）處理組；⑼PDGF-B（5.0

4、ng/mL）處理組；⑽PDGF-B（10ng/mL）處理組；⑾PDGF-B（20ng/mL）處理組。用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力；FCM檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞NF-κB的表達(dá)變化情況。經(jīng)不同濃度大黃素（1.0μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL）作用HepG2細(xì)胞，免疫組化半定量分析PDGF蛋白表達(dá)變化情況。
　　 結(jié)果：
　　 HepG2細(xì)胞表達(dá)PDGF-A、PDGF-B及其受體PDGFR-

5、α、PDGFR-β。PDGF-A、PDGF-B、PDGFR-β為胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)，PDGFR-α為胞質(zhì)及胞核陽(yáng)性表達(dá)。
　　 外源性PDGF-A及PDGF-B均可促進(jìn)HepG2細(xì)胞增殖，細(xì)胞增殖曲線顯示作用強(qiáng)度與生長(zhǎng)因子濃度關(guān)聯(lián)，在0－20ng/mL濃度范圍內(nèi)呈峰形變化，5ng/mL濃度時(shí)作用最強(qiáng)；抑制細(xì)胞凋亡，影響細(xì)胞周期進(jìn)展，使G0/G1期細(xì)胞比例下降，S期細(xì)胞比例上升，增殖指數(shù)PI升高；并促進(jìn)細(xì)胞NF-κB表達(dá)，對(duì)PDGFR表

6、達(dá)有上調(diào)作用，PDGF-A以α受體上調(diào)作用為主，PDGF-B以β受體上調(diào)作用為主。且PDGF-B作用強(qiáng)于PDGF-A。電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)顯示極度增殖活躍表現(xiàn)。
　　 大黃素可明顯抑制PDGF誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，改變細(xì)胞周期，使G2/M期細(xì)胞比例升高，S期細(xì)胞比例降低。大黃素還可阻斷PDGF對(duì)NF-κB表達(dá)增強(qiáng)的誘導(dǎo)作用。且大黃素能抑制HepG2細(xì)胞自身PDGF的表達(dá)，作用強(qiáng)度呈劑量依賴性。
　　 結(jié)