血小板衍生生長因子在人肝癌細胞中的表達及意義.pdf

1、背景與目的：
　　 血小板衍生生長因子（platelet-derived growth factor，PDGF）及其受體PDGFR（platelet-derived growth factor receptor）在多種人類腫瘤中表達，參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展，因此日益引起關(guān)注。本文旨在研究PDGF及PDGFR在人肝癌HepG2細胞中的表達情況及其對細胞增殖和凋亡的作用。在此基礎(chǔ)上，觀察大黃素對HepG2細胞體外增殖的影響并探討其與PD

2、GF作用的相關(guān)機制。從而為抗腫瘤治療提供有用的實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 1. 體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細胞，用免疫組織化學(xué)方法檢測細胞中PDGF及PDGFR的表達并予分型。
　　 2. 經(jīng)外源性PDGF-A、PDGF-B細胞因子（0－20ng/mL）作用培養(yǎng)細胞后，用MTT法檢測細胞增殖活性；流式細胞儀（FCM）檢測細胞周期分布和細胞凋亡；免疫組織化學(xué)半定量分析NF-κB和PDGFR表達情況；電鏡觀察細胞超

3、微結(jié)構(gòu)變化。
　　 3. 體外培養(yǎng)HepG2細胞，經(jīng)不同濃度PDGF或PDGF與大黃素共同作用。實驗分組：⑴對照組；⑵PDGF-A（1.25ng/mL）處理組；⑶PDGF-A（2.5ng/mL）處理組；⑷PDGF-A（5.0ng/mL）處理組；⑸PDGF-A（10ng/mL）處理組；⑹PDGF-A（20ng/mL）處理組；⑺PDGF-B（1.25ng/mL）處理組；⑻PDGF-B（2.5ng/mL）處理組；⑼PDGF-B（5.0

4、ng/mL）處理組；⑽PDGF-B（10ng/mL）處理組；⑾PDGF-B（20ng/mL）處理組。用MTT法檢測細胞活力；FCM檢測細胞周期和細胞凋亡；免疫組織化學(xué)法檢測細胞NF-κB的表達變化情況。經(jīng)不同濃度大黃素（1.0μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL）作用HepG2細胞，免疫組化半定量分析PDGF蛋白表達變化情況。
　　 結(jié)果：
　　 HepG2細胞表達PDGF-A、PDGF-B及其受體PDGFR-

5、α、PDGFR-β。PDGF-A、PDGF-B、PDGFR-β為胞質(zhì)陽性表達，PDGFR-α為胞質(zhì)及胞核陽性表達。
　　 外源性PDGF-A及PDGF-B均可促進HepG2細胞增殖，細胞增殖曲線顯示作用強度與生長因子濃度關(guān)聯(lián)，在0－20ng/mL濃度范圍內(nèi)呈峰形變化，5ng/mL濃度時作用最強；抑制細胞凋亡，影響細胞周期進展，使G0/G1期細胞比例下降，S期細胞比例上升，增殖指數(shù)PI升高；并促進細胞NF-κB表達，對PDGFR表

6、達有上調(diào)作用，PDGF-A以α受體上調(diào)作用為主，PDGF-B以β受體上調(diào)作用為主。且PDGF-B作用強于PDGF-A。電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)顯示極度增殖活躍表現(xiàn)。
　　 大黃素可明顯抑制PDGF誘導(dǎo)的HepG2細胞增殖，促進細胞凋亡，改變細胞周期，使G2/M期細胞比例升高，S期細胞比例降低。大黃素還可阻斷PDGF對NF-κB表達增強的誘導(dǎo)作用。且大黃素能抑制HepG2細胞自身PDGF的表達，作用強度呈劑量依賴性。
　　 結(jié)