肝癌衍生生長因子-2在大鼠正常和受損傷脊髓組織中的表達(dá).pdf

1、背景與目的：
　　脊髓損傷(SpinalCordInjury，SCI)以其較高的致殘率和死亡率威脅著人類健康。以往許多學(xué)者嘗試神經(jīng)或細(xì)胞移植、應(yīng)用神經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)干細(xì)胞或嗅鞘細(xì)胞移植等方法治療脊髓損傷。無論采用何種措施，促進(jìn)中樞神經(jīng)纖維的再生和修復(fù)，盡早建立神經(jīng)傳導(dǎo)的完整性是促進(jìn)脊髓神經(jīng)功能恢復(fù)的前提。
　　研究顯示，多種神經(jīng)營養(yǎng)因子具有明確促進(jìn)中樞神經(jīng)軸突再生和神經(jīng)纖維修復(fù)的作用。對于截癱患者，運動功能的恢復(fù)無疑是最重要

2、的。為此，表達(dá)在運動神經(jīng)元，可能具有促進(jìn)運動功能恢復(fù)的神經(jīng)營養(yǎng)因子備受關(guān)注。
　　肝癌衍生生長因子(Hepatoma-derivedgrowthfactor,HDGF)最初是從人肝癌細(xì)胞株HuH-7的無血清培養(yǎng)液中分離出來的、能與肝素結(jié)合并促進(jìn)細(xì)胞分裂和增殖的一種新的生長因子。HDGF蛋白家族成員廣泛地分布于肝、腎、心、腦和睪丸等多種組織中，具有重要的生物學(xué)作用。研究顯示，HDGF是一種新型的神經(jīng)營養(yǎng)因子,具有保護(hù)脊髓運動神經(jīng)元存

3、活和促進(jìn)運動神經(jīng)元的軸突延伸的作用。
　　HDGF-2是最新發(fā)現(xiàn)的一種只在神經(jīng)細(xì)胞，不在內(nèi)臟器官中表達(dá)的亞型。但其是否在正常脊髓和損傷脊髓中的表達(dá)，及其表達(dá)變化的規(guī)律，尚不清楚。為此，本實驗通過動物實驗，觀察HDGF-2在大鼠正常脊髓、大鼠胚胎脊髓和受損傷的脊髓中的表達(dá)，闡明HDGF-2在脊髓發(fā)育和損傷過程中的變化，初步揭示它的生理與病理特征。
　　材料及方法：
　?。?）取120只S-D（Sprague-Dawley

4、）成年大鼠（所有大鼠由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供），雌雄不限，隨機(jī)分成4組（A、B、C、D組）,每組30只。A組為對照組，B、C、D組為實驗組。對照組行單純椎板切除術(shù)，采用改良Allen，s法建立脊髓損傷動物模型，分別于損傷后不同的時間段：術(shù)后1天（B組）、21天（C組）、45天（D組）分別采集受損傷的脊髓標(biāo)本，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。
　?。?）取性成熟S-D大鼠配對，于E19時處死孕鼠，取胎鼠脊髓組織行免疫組織化學(xué)法染色。<

5、br>　?。?）應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)觀察HDGF-2在正常脊髓、受損傷脊髓以及胎鼠脊髓中表達(dá)情況。
　?。?）采用BBB評分對大鼠行為功能評分，記錄受損傷大鼠脊髓行為功能。
　?。?）實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）對連續(xù)性數(shù)據(jù)進(jìn)行描述。對各組數(shù)據(jù)常規(guī)進(jìn)行正態(tài)性檢驗、方差齊性檢驗。計量資料若方差齊時用t檢驗，若方差不齊時用t’檢驗;計數(shù)數(shù)據(jù)采用x2檢驗。以P＜0.05為差異有

6、統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01為差異具有高度統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　（1）HDGF-2在大鼠正常脊髓、胚胎脊髓和受損傷脊髓中均有表達(dá)。在脊髓白質(zhì)及灰質(zhì)的脊髓前角神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞中主要表達(dá)于神經(jīng)細(xì)胞核，胞漿中也可見其弱表達(dá)。
　?。?）在正常組，HDGF-2在神經(jīng)細(xì)胞核陽性表達(dá)率為20％（6/30），在胞漿陽性表達(dá)率為16.67%（5/30）；胎鼠脊髓神經(jīng)細(xì)胞核陽性表達(dá)率為70%（28/40）,在胞漿陽性表達(dá)率為70%（

7、28/40）；在受損傷脊髓，細(xì)胞核內(nèi)HDGF-2陽性表達(dá)率為83.33%（70/84），在胞漿陽性表達(dá)率79.95%（68/84）。胎鼠脊髓與正常脊髓、受損傷脊髓與正常脊髓之間神經(jīng)細(xì)胞核及胞漿HDGF-2表達(dá)差異具有顯著性(P＜0.05)。
　?。?）大鼠脊髓損傷不同時間點HDGF-2表達(dá)情況：脊髓損傷后1d、21d、45d，HDGF-2陽性表達(dá)率分別為92.86%(267/28)、82.76%(24/29)、55.56%(15/

8、27）。采用Pearsonx2檢驗顯示差異具有顯著性（P＜0.01），進(jìn)一步平均分差檢驗檢測三組之間沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　?。?）BBB評分：術(shù)前A組20.5±0.5,B組20.8±0.2，C組20.7±0.3，D組21分。t檢驗術(shù)前各組之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。術(shù)前B、C、D組BBB評分為20.6±0.40，術(shù)后1天為：4±0.30，t檢驗結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
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