大鼠急性脊髓損傷后血小板衍化生長(zhǎng)因子-B的表達(dá).pdf

1、研究背景:脊髓損傷后神經(jīng)元的再生修復(fù)一直是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的前沿課題。在脊髓損傷的病理過程中,多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子參與其中。血小板衍化生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor, PDGF)是由多種細(xì)胞合成和分泌的,它與神經(jīng)細(xì)胞上的特異性受體結(jié)合后能促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞增殖、分化、趨化和預(yù)防程序性死亡。PDGF,尤其是 PDGF-B及其受體在神經(jīng)系統(tǒng)中有廣泛的表達(dá),與腦部腫瘤、腦血管疾病和脫髓鞘疾病等多種神經(jīng)系統(tǒng)的疾病發(fā)生密

2、切相關(guān)。為了進(jìn)一步了解PDGF-B在中樞神經(jīng)損傷后對(duì)神經(jīng)修復(fù)的作用,本研究采用了改制Ⅱ型紐約大學(xué)(New York University, NYU)裝置,根據(jù)NYU實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)制備SD大鼠動(dòng)物模型,用免疫組化和反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法,檢測(cè)大鼠脊髓急性損傷后不同時(shí)段PDGF-B表達(dá)的變化,觀察PDGF-B表達(dá)的變化規(guī)律,探索對(duì)損傷脊髓神經(jīng)的保護(hù)作用及其對(duì)損傷脊髓功能恢復(fù)的影響。
　　目的:探討血小板衍化生長(zhǎng)因子B(PD

3、GF-B)在脊髓損傷后對(duì)脊髓功能恢復(fù)的作用。
　　材料與方法:成年雌性Sprague-Daley(SD)大鼠,體質(zhì)量180~220 g(南方醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)48只。隨機(jī)分為6組,對(duì)照組8只,實(shí)驗(yàn)組40只。大鼠以戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔注射麻醉,用改制Ⅱ型紐約大學(xué)(New York University, NYU)裝置,對(duì)暴露脊髓的T10節(jié)段進(jìn)行撞擊。分別于脊髓損傷后3、7、14、21、28d對(duì)實(shí)驗(yàn)組大鼠進(jìn)行BBB

4、(Basso, Beattie, Bresnahan locomotor rating scale)評(píng)分,檢測(cè)大鼠術(shù)后運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)(評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)見附錄1)。于術(shù)后1、3、7、14、28d(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只大鼠)取脊髓T9~11節(jié)段,分別制作石蠟組織連續(xù)切片(n=5,片厚5μm)行HE染色和PDGF-B免疫組織化學(xué)染色,同時(shí)提取損傷段脊髓總RNA對(duì)PDGF-B mRNA的表達(dá)進(jìn)行半定量RT-PCR(n=3)。
　　結(jié)果:脊髓損傷后1d,

5、損傷脊髓節(jié)段神經(jīng)元存活率顯著下降。免疫組化結(jié)果顯示,PDGF-B陽性細(xì)胞數(shù)在脊髓損傷后1d迅速減少(P<0.01),隨后逐漸增多,7d后維持在一定的水平,14d后PDGF-B陽性細(xì)胞數(shù)增多,28d達(dá)到高峰(85.00±13.49),主要表達(dá)于壞死區(qū)增生的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。半定量RT-PCR結(jié)果顯示,脊髓損傷后1d,PDGF-B的mRNA水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05),隨后開始升高,3d時(shí)接近正常水平(與正常比P>0.05),隨后略有下降

6、.經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析,3,7與14d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),28d時(shí)達(dá)到正常水平。
　　結(jié)論:脊髓中度撞擊傷后,PDGF-B參與神經(jīng)損傷后的應(yīng)激性反應(yīng),保護(hù)瀕危神經(jīng)元。隨后通過刺激膠質(zhì)細(xì)胞增殖和分化的作用,參與了膠質(zhì)細(xì)胞活化、增生的病理變化過程,刺激膠質(zhì)細(xì)胞增殖,形成膠質(zhì)瘢痕。另一方面,PDGF-B還可以與瀕危神經(jīng)元上的PDGF-B受體結(jié)合而產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用。說明脊髓受到損傷后可通過PDGF-B來營(yíng)養(yǎng)和支持神經(jīng)細(xì)胞