嚴(yán)重?zé)齻笫蠓闻c膈肌凋亡及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：嚴(yán)重?zé)齻颊咄殡S呼吸功能障礙，治療效果差，因此被認(rèn)為是燒傷早期的主要死因之一。既往研究發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重?zé)齻鸬姆螕p傷和呼吸肌萎縮是造成呼吸功能障礙的兩個主要原因。其中，凋亡在燒傷引起的肺損傷中扮演重要角色;而骨骼肌核凋亡也被認(rèn)為是嚴(yán)重?zé)齻笏闹趋兰∥s的重要機(jī)制之一。因此，本研究擬在此基礎(chǔ)上探討:1、嚴(yán)重?zé)齻笫蠓谓M織凋亡發(fā)生的規(guī)律、對肺組織的影響，以及Hippo信號通路可能的參與調(diào)節(jié)機(jī)制;2、嚴(yán)重?zé)齻笫箅跫『说蛲霭l(fā)生的規(guī)律和死

2、亡受體通路在其中扮演的角色。
　　方法：1、Wistar大鼠32只（雄性，清潔級），用隨機(jī)數(shù)表法分為假傷組(SB組)、燒傷組（B組）、燒傷12周康復(fù)組（12WR組）及燒傷12周康復(fù)+二次燒傷組(12WB組)各8只。肺組織標(biāo)本采集時間為:SB組和B組于致傷后第4天;12WR組和12WB組則為接受為期12周的康復(fù)期后，再次分別接受第二次假傷和燒傷，并于傷后第4天搜集標(biāo)本，方法同前。使用Western印跡法檢測肺組織Bcl-2、Bcl-

3、xl、Bax、剪切體Caspase-3、YAP、P-YAP、MST、P-MST、LATS1、LATS2表達(dá)水平，使用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記測定法(TUNEL)檢測肺組織細(xì)胞凋亡水平，免疫組化檢測肺組織P-YAP表達(dá)水平，Masson三色染色和天狼星紅苦味酸染色法用于檢測肺組織膠原表達(dá)水平;2、80只Wistar大鼠（雄性，清潔級）隨機(jī)分2組:假傷組（n=40）和燒傷組（n=40），并分別在傷后第0、1、4、7、1

4、0天每組每次8只大鼠，取腹主動脈血和完整膈肌。使用投射電鏡(TEM)觀察膈肌凋亡超微結(jié)構(gòu);使用免疫組化觀察膈肌Caspase-3表達(dá);使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清sFas、sFasL及sTRAIL水平;使用Western blot檢測膈肌Akt、P-Akt、Bax、Bcl-2、caspase-8、caspase-3蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1、Masson三色染色和天狼星紅苦味酸染色病理均顯示12WR組和12WB組肺

5、組織纖維化明顯。大鼠肺組織細(xì)胞TUNEL凋亡率:B組、12R組及12WB組均顯著高于SB組（均P＜0.05）。B組、12R組及12WB組的剪切體Caspase-3、P-YAP/YAP、Bax/Bcl-2、P-MST、MST和LATS1均顯著高于SB組（均P＜0.05）。P-YAP免疫組化提示，B組、12R組及12WB組的P-YAP表達(dá)增高。2、嚴(yán)重?zé)齻蟠笫篌w重明顯降低，膈肌重量和CSA也顯著下降;透射電鏡(TEM)觀察到燒傷后膈肌細(xì)胞

6、胞質(zhì)濃縮，胞膜邊緣起泡，線粒體腫脹等典型凋亡現(xiàn)象;燒傷組TUNEL陽性細(xì)胞率高于假傷組;燒傷組血清sFasL/sFas和sTRAIL高于假傷組（均P＜0.05）;Western Blot結(jié)果，燒傷組第1、4天p-Akt明顯下降，Bax/Bcl-2于第1、4、7天明顯上升，剪切體Caspas-8在第1、4天表達(dá)明顯增加，剪切體Caspase-3表達(dá)水平在第4天達(dá)到頂峰;免疫組化Caspase-3提示燒傷后Caspase-3主要在膈肌肌核內(nèi)