急性樂果中毒大鼠膈肌細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的:急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒(acute organophosphomspesticides poisoning，AOPP)的主要致死原因是呼吸衰竭，而以呼吸肌麻痹為特征的外周性呼吸衰竭占有重要地位。探討AOPP后呼吸肌麻痹發(fā)生機(jī)制，尋求合理有效的治療方法，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。膈肌是最主要的呼吸肌，又是對有機(jī)磷最敏感的橫紋肌，有機(jī)磷中毒是否存在膈肌細(xì)胞凋亡及其在呼吸肌麻痹中的作用、其機(jī)制如何均少見報(bào)道。另外，多年來一直認(rèn)為樂果中毒應(yīng)用復(fù)能劑

2、無效，近年來臨床上提出了不同的觀點(diǎn)。其具體療效如何、作用機(jī)制怎樣均有待于進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)通過觀察急性樂果中毒大鼠臨床表現(xiàn)、膈肌細(xì)胞凋亡百分比、膈肌細(xì)胞凋亡基因bax、bcl2的表達(dá)及其二者的比值變化(bax/bcl2)，進(jìn)一步探討膈肌細(xì)胞凋亡在有機(jī)磷中毒呼吸肌麻痹中的作用；并通過觀察不同劑量氯磷定和/或抗膽堿能藥物對其影響，了解氯磷定在急性樂果中毒中的治療作用及其機(jī)制，為急性樂果中毒應(yīng)用復(fù)能劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，進(jìn)一步完善急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒

3、的救治方案。 方法：本實(shí)驗(yàn)隨機(jī)將150只SD大鼠隨機(jī)分為5組：正常對照組(A組)36只、未治療組(B組)6只、單用阿托品組(C組)36只、小劑量氯磷定+阿托品組(D組)36只、大劑量氯磷定+阿可托品組(E組)36只，除對照組外均給予，胃內(nèi)灌注2LD50(640mg/kg)的樂果，制備有機(jī)磷中毒模型。對照組給予生理鹽水灌胃觀察，未治療組觀察其臨床變化及轉(zhuǎn)歸情況。參與治療的3組大鼠給予大、小不同劑量的氯磷定+阿托品或單用阿托品治療，

4、阿托品用法一致，染毒后3分鐘給予阿托品10mg/kg肌注，此后據(jù)其流涎，流淚等毒蕈堿樣癥狀酌情追加給藥。氯磷定用法：小劑量氯磷定組首劑10mg/kg與阿托品一同肌注，然后于2h、4h、6h分別給予5mg/kg肌注；大劑量組為首劑突擊量20mg/kg肌注，此后10mg/kg肌注q1h 3次、q2h 3次、q3h至24h、q4h至48h、q6h至4d。觀察各組中毒大鼠臨床表現(xiàn)：流涎、流淚、呼吸、肌顫、肌力等，了解不同治療情況下中毒大鼠病情變

5、化特點(diǎn)及其規(guī)律。于染毒后未治療組待大鼠死亡，對照組、各治療組于染毒后1d、2d、4d、8d、10d、12d斷頭處死大鼠，分別取膈肌，提取膈肌單細(xì)胞懸液，用流式細(xì)胞儀的方法觀察不同治療情況下各組中毒大鼠不同時(shí)間膈肌細(xì)胞凋亡百分比，凋亡基因bax、bcl2的表達(dá)、bax/bcl2的變化規(guī)律以及藥物治療對其的影響。結(jié)果：1、臨床表現(xiàn)：在樂果染毒后未治療組大鼠很快出現(xiàn)流涎、全身波浪狀肌顫、呼吸困難、抽搐，最后因呼吸衰竭而于9.29±8.55h死

6、亡；阿托品治療可很好地改善染毒大鼠流涎、眼分泌物增多等癥狀，呼吸困難、肌顫、肌無力等癥狀均延遲出現(xiàn)，且持續(xù)時(shí)間縮短，可挽救大部分中毒大鼠生命；給予氯磷定+阿托品治療組大鼠與單用阿托品治療組相比，呼吸困難，全身肌顫，抽搐，肌無力等癥狀出現(xiàn)相對較晚，且程度輕，癥狀消失快，差異顯著(p＜0.05)。在同時(shí)間點(diǎn)大量氯磷定治療組大鼠比小劑量氯磷定組癥狀輕、恢復(fù)快，療效優(yōu)于后者，差異顯著(p＜0.05)。 2、流式細(xì)胞儀DNA倍體分析：(1

7、)不同治療組大鼠(C、D、E組)染毒后2-12天膈肌細(xì)胞凋亡百分比均高于正常對照組(A組)，有顯著性差異(p＜0.01)，且存在一定變化趨勢：不同治療組(C、D、E組)膈肌細(xì)胞凋亡百分比隨時(shí)間逐漸升高，至8天達(dá)高峰，隨后下降。其中C組膈肌細(xì)胞凋亡百分比均高于D、E組，染毒后10-12天差異更顯著(p＜0.01)；染毒后10-12天D組與E組膈肌細(xì)胞凋亡百分比有顯著性差異(p＜0.05)。 3、凋亡基因表達(dá)：(1)染毒后不同治療組大鼠(C

8、、D、E組)膈肌細(xì)胞凋亡基因bax表達(dá)不同程度的升高。其中C組凋亡基因bax表達(dá)較正常對照組(A組)升高有顯著性差異(p＜0.01或p＜0.05)，至4天達(dá)高峰，隨后下降，染毒后12天接近正常；染毒后4-8天D組膈肌細(xì)胞凋亡基因bax表達(dá)較正常對照組(A組)升高，有顯著性差異(p＜0.01.或p＜0.05)，染毒后10天下降接近正常；染毒后8天E組膈肌細(xì)胞凋亡基因bax表達(dá)較正常對照組(A組)升高有顯著性差異(p＜0.05)，染毒后10

9、天下降接近正常。C組較D、E組凋亡基因bax表達(dá)升高，有顯著差異(p＜0.05)；同時(shí)間點(diǎn)E組凋亡基因bax表達(dá)較D組表達(dá)有降低趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。(2)凋亡基因bcl2表達(dá)：各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。(3)染毒后不同治療組大鼠(C、D、E組)凋亡基因bax/bcl2比值不同程度的升高。其中C組凋亡基因bax/bcl2較正常對照組(A組)升高有顯著性差異(p＜0.05)，至4天達(dá)高峰，隨后下降；染毒后2天D組

10、凋亡基因bax/bcl2有一定升高，有顯著性差異(p＜0.05)，隨后下降； C組較D、E組凋亡基因bax/bcl2升高有顯著差異(p＜0.05)；而同時(shí)間點(diǎn)E組bax/bcl2較D組有降低趨勢，但無顯著差異(p＞0.05)。結(jié)論：1.急性樂果中毒大鼠存在膈肌細(xì)胞凋亡，而其變化趨勢與臨床上呼吸肌麻痹出現(xiàn)和恢復(fù)時(shí)間相似，故可能是導(dǎo)致呼吸肌麻痹原因之一。2.有機(jī)磷農(nóng)藥中毒可能通過誘導(dǎo)凋亡基因bax高表達(dá)及提高凋亡基因bax/bcl2比值而誘