補(bǔ)骨脂乙素抗菌機(jī)制研究.pdf

1、本論文分3章，第一章對(duì)中藥體外抗菌活性和抗菌機(jī)制進(jìn)行綜述。第二章研究中藥補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂乙素和新補(bǔ)骨脂異黃酮對(duì)臨床常見的金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（Methcillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA）、產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶金黃色葡萄球菌（Extended spectrumβ-lactamases Staphylococcus aur

2、eus，ESBLs-SA）、大腸桿菌（Escherichia coli，EC）、產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸桿菌（Extended spectrumβ-lactamasesEscherichia coli，ESBLs-EC）和銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）的抑菌圈（Inhibition Zone，IZ）、最低抑菌濃度（Minimal Inhibitory Concentration，MIC）、最低殺菌濃度

3、（Minimum Bactericidal Concentration，MBC)以及半數(shù)抑菌濃度（50％ Inhibitory Concentration，IC50）的作用。第三章借助掃描電鏡（Scanning Electron Microscope）工具研究補(bǔ)骨脂乙素對(duì)SA、MRSA、ESBLs-SA細(xì)菌外觀形態(tài)的改變，同時(shí)又以堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，AKP)、電導(dǎo)率（Total Dissolved So

4、lids，TDS）、胞外可溶性蛋白泄漏量、SDS-PAGE電泳蛋白譜帶為測(cè)定指標(biāo)，測(cè)定了細(xì)菌在不同時(shí)間點(diǎn)的變化規(guī)律。
　　第一章、中藥體外抗菌活性和機(jī)制的研究進(jìn)展
　　對(duì)中藥體外抗菌活性和抗菌機(jī)制進(jìn)行綜述。
　　第二章、補(bǔ)骨脂乙素和新補(bǔ)骨脂異黃酮對(duì)臨床常見菌株體外抗菌活性研究
　　采用紙片擴(kuò)散法(K-B法)測(cè)定了補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂乙素和新補(bǔ)骨脂異黃酮對(duì)臨床常見菌株的抑菌圈(IZ)和最低抑菌濃度(MIC)；采用液體連續(xù)

5、培養(yǎng)法和平皿涂布菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定了最低殺菌濃度(MBC)；采用液體連續(xù)培養(yǎng)法測(cè)定了半數(shù)抑菌濃度(IC50)。
　　抑菌圈(IZ)結(jié)果顯示，補(bǔ)骨脂乙素和新補(bǔ)骨脂異黃酮對(duì)SA、MRSA和ESBLs-SA均有較好的抗菌活性，在濃度均為2.5mg/mL情況下，補(bǔ)骨脂乙素的抑菌圈直徑較新補(bǔ)骨脂異黃酮大，但兩者對(duì)PA、ESBLs-EC和EC均沒有抗菌活性。最低抑菌濃度（MIC)結(jié)果顯示，補(bǔ)骨脂乙素對(duì)3種菌株的MIC分別為 SA（MIC=0.07

6、8mg/mL），MRSA（MIC=0.156mg/mL）和ESBLs-SA（MIC=0.078mg/mL）；新補(bǔ)骨脂異黃酮對(duì)SA、MRSA和ESBLs-SA的MIC均為0.625mg/mL。最低殺菌濃度(MBC)結(jié)果顯示，補(bǔ)骨脂乙素對(duì)ESBLs-SA有較好的殺菌作用MBC僅僅為0.078mg/mL；新補(bǔ)骨脂異黃酮對(duì)MRSA和ESBLs-SA有較好的殺菌作用，兩者的MBC均為1.25mg/mL。
　　半數(shù)抑菌濃度（IC50）結(jié)果顯示

7、，補(bǔ)骨脂乙素對(duì)3種菌株的IC50分別為SA(IC50=0.031±0.001mg/mL)，MRSA（IC50=0.106±0.005mg/mL）和ESBLs-SA(IC50=0.048±0.001mg/mL)；新補(bǔ)骨脂異黃酮對(duì)3種菌株的IC50分別為SA(IC50=0.627±0.002mg/mL)，MRSA(IC50=0.381±0.002mg/mL)和ESBLs-SA(IC50=0.359±0.003mg/mL)。綜上所述，補(bǔ)骨脂乙

8、素和新補(bǔ)骨脂異黃酮對(duì)SA、MRSA和ESBLs-SA均有較好的抗菌活性，其中補(bǔ)骨脂乙素的體外抗菌活性較為顯著。
　　第三章、補(bǔ)骨脂乙素抗菌機(jī)制研究
　　采用紙片擴(kuò)散法(K-B法)測(cè)定補(bǔ)骨脂乙素最低抑菌濃度(MIC)；采用液體連續(xù)培養(yǎng)法和平皿涂布菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定補(bǔ)骨脂乙素最低殺菌濃度(MBC)，在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行了補(bǔ)骨脂乙素抗菌機(jī)制的研究。MIC結(jié)果顯示，補(bǔ)骨脂乙素對(duì)SA和ESBLs-SA的活性較為顯著（MIC=0.078mg/m

9、L）；MBC結(jié)果顯示，補(bǔ)骨脂乙素對(duì)ESBLs-SA的殺菌活性最為顯著（MBC=0.078mg/mL），且ESBLs-SA（MIC）與ESBLs-SA（MBC）完全相等。
　　以最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)為測(cè)定指標(biāo)：首先通過掃描電鏡觀察細(xì)菌整體形態(tài)的變化，再測(cè)定電導(dǎo)率（TDS）、堿性磷酸酶（AKP）、胞外可溶性蛋白含量和SDS-PAGE電泳譜帶變化從而對(duì)補(bǔ)骨脂乙素的抗菌機(jī)制進(jìn)行研究。抗菌機(jī)制研究結(jié)果顯示，通過掃描