補骨脂乙素抗菌機制研究.pdf

1、本論文分3章，第一章對中藥體外抗菌活性和抗菌機制進行綜述。第二章研究中藥補骨脂中補骨脂乙素和新補骨脂異黃酮對臨床常見的金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（Methcillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA）、產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶金黃色葡萄球菌（Extended spectrumβ-lactamases Staphylococcus aur

2、eus，ESBLs-SA）、大腸桿菌（Escherichia coli，EC）、產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸桿菌（Extended spectrumβ-lactamasesEscherichia coli，ESBLs-EC）和銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）的抑菌圈（Inhibition Zone，IZ）、最低抑菌濃度（Minimal Inhibitory Concentration，MIC）、最低殺菌濃度

3、（Minimum Bactericidal Concentration，MBC)以及半數(shù)抑菌濃度（50％ Inhibitory Concentration，IC50）的作用。第三章借助掃描電鏡（Scanning Electron Microscope）工具研究補骨脂乙素對SA、MRSA、ESBLs-SA細菌外觀形態(tài)的改變，同時又以堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，AKP)、電導率（Total Dissolved So

4、lids，TDS）、胞外可溶性蛋白泄漏量、SDS-PAGE電泳蛋白譜帶為測定指標，測定了細菌在不同時間點的變化規(guī)律。
　　第一章、中藥體外抗菌活性和機制的研究進展
　　對中藥體外抗菌活性和抗菌機制進行綜述。
　　第二章、補骨脂乙素和新補骨脂異黃酮對臨床常見菌株體外抗菌活性研究
　　采用紙片擴散法(K-B法)測定了補骨脂中補骨脂乙素和新補骨脂異黃酮對臨床常見菌株的抑菌圈(IZ)和最低抑菌濃度(MIC)；采用液體連續(xù)

5、培養(yǎng)法和平皿涂布菌落計數(shù)法測定了最低殺菌濃度(MBC)；采用液體連續(xù)培養(yǎng)法測定了半數(shù)抑菌濃度(IC50)。
　　抑菌圈(IZ)結果顯示，補骨脂乙素和新補骨脂異黃酮對SA、MRSA和ESBLs-SA均有較好的抗菌活性，在濃度均為2.5mg/mL情況下，補骨脂乙素的抑菌圈直徑較新補骨脂異黃酮大，但兩者對PA、ESBLs-EC和EC均沒有抗菌活性。最低抑菌濃度（MIC)結果顯示，補骨脂乙素對3種菌株的MIC分別為 SA（MIC=0.07

6、8mg/mL），MRSA（MIC=0.156mg/mL）和ESBLs-SA（MIC=0.078mg/mL）；新補骨脂異黃酮對SA、MRSA和ESBLs-SA的MIC均為0.625mg/mL。最低殺菌濃度(MBC)結果顯示，補骨脂乙素對ESBLs-SA有較好的殺菌作用MBC僅僅為0.078mg/mL；新補骨脂異黃酮對MRSA和ESBLs-SA有較好的殺菌作用，兩者的MBC均為1.25mg/mL。
　　半數(shù)抑菌濃度（IC50）結果顯示

7、，補骨脂乙素對3種菌株的IC50分別為SA(IC50=0.031±0.001mg/mL)，MRSA（IC50=0.106±0.005mg/mL）和ESBLs-SA(IC50=0.048±0.001mg/mL)；新補骨脂異黃酮對3種菌株的IC50分別為SA(IC50=0.627±0.002mg/mL)，MRSA(IC50=0.381±0.002mg/mL)和ESBLs-SA(IC50=0.359±0.003mg/mL)。綜上所述，補骨脂乙

8、素和新補骨脂異黃酮對SA、MRSA和ESBLs-SA均有較好的抗菌活性，其中補骨脂乙素的體外抗菌活性較為顯著。
　　第三章、補骨脂乙素抗菌機制研究
　　采用紙片擴散法(K-B法)測定補骨脂乙素最低抑菌濃度(MIC)；采用液體連續(xù)培養(yǎng)法和平皿涂布菌落計數(shù)法測定補骨脂乙素最低殺菌濃度(MBC)，在此基礎上，進行了補骨脂乙素抗菌機制的研究。MIC結果顯示，補骨脂乙素對SA和ESBLs-SA的活性較為顯著（MIC=0.078mg/m

9、L）；MBC結果顯示，補骨脂乙素對ESBLs-SA的殺菌活性最為顯著（MBC=0.078mg/mL），且ESBLs-SA（MIC）與ESBLs-SA（MBC）完全相等。
　　以最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)為測定指標：首先通過掃描電鏡觀察細菌整體形態(tài)的變化，再測定電導率（TDS）、堿性磷酸酶（AKP）、胞外可溶性蛋白含量和SDS-PAGE電泳譜帶變化從而對補骨脂乙素的抗菌機制進行研究?？咕鷻C制研究結果顯示，通過掃描