五味子乙素抑制UVB對(duì)HaCaT、FB細(xì)胞的損傷及機(jī)制研究.pdf

1、五味子乙素(Schisandrin B,SchB)是從傳統(tǒng)中藥北五味子中提取獲得。已有研究發(fā)現(xiàn)它可以清除肝細(xì)胞中的自由基及脂質(zhì)過氧化物,并可提高肝細(xì)胞中抗氧化物酶的表達(dá),但它在皮膚紫外防護(hù)的研究中國內(nèi)外均未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以五味子乙素為研究對(duì)象,探討其抑制UVB對(duì)皮膚細(xì)胞的損傷及作用機(jī)制。
　　 目的:探討SchB抑制UVB對(duì)HaCaT、FB細(xì)胞的損傷,并初步研究其保護(hù)機(jī)制。
　　 方法:
　　 1、體外UVB損傷

2、模型制作及藥物保護(hù)作用的測(cè)定:實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為5組:空白組、UVB照射組、UVB照射+不同濃度的SchB(0.1μmol/L～10μmol/L)。以MTT測(cè)定細(xì)胞生存率。
　　 2、測(cè)定SchB對(duì)UVB損傷模型中SOD(超氧化物歧化酶)、GSH-Px(谷胱甘肽過氧化物酶)與MDA(丙二醛)的含量變化3、測(cè)定SchB對(duì)A375細(xì)胞中酪氨酸酶及黑色素的含量變化。
　　 4、測(cè)定SchB對(duì)UVB損傷模型中ROS的變化及對(duì)UVB損傷

3、模型的形態(tài)觀察。
　　 5、測(cè)定SchB對(duì)UVB損傷模型中p53、bax、p21、caspase-3、cox-2、mmp-1、IL-10、IL-1,tnf-a mRNA的表達(dá)。
　　 6、免疫組化法觀察不同濃度SchB對(duì)UVB損傷模型中Cox-2蛋白表達(dá)。
　　 7、Western-blot法檢測(cè)不同濃度SchB對(duì)uVB損傷模型中COL1A蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1、SchB對(duì)UVB

4、損傷模型的保護(hù):
　　 經(jīng)MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)適量紫外線輻射對(duì)HaCaT,FB細(xì)胞的正常生理功能無影響,但當(dāng)紫外線照射強(qiáng)度達(dá)到一定強(qiáng)度后,細(xì)胞的生存率明顯降低,并隨著照射強(qiáng)度的增加而減小。根據(jù)照射強(qiáng)度和細(xì)胞生存率,選定照射強(qiáng)度為30mJ/cm2建立UVB損傷模型。研究發(fā)現(xiàn)SchB抑制了UVB對(duì)HaCaT、FB細(xì)胞的損傷,與對(duì)照組相比,具有顯著性差異。
　　 2、SchB對(duì)UVB損傷模型中的抗氧化酶SOD,GSH-Px及脂質(zhì)過

5、氧化物MDA的影響采用酶化學(xué)法測(cè)定UVB損傷模型中的抗氧化物酶SOD,GSH-Px及脂質(zhì)過氧化物MDA的變化。結(jié)果顯示SchB可升高UVB損傷模型中的抗氧化物酶含量,降低其脂質(zhì)過氧化物MDA的含量,與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3、SchB對(duì)A375細(xì)胞中酪氨酸酶及黑色素的影響利用NaOH法測(cè)定SchB對(duì)A375細(xì)胞中酪氨酸酶含量,結(jié)果表明SchB可降低A375細(xì)胞中酪氨酸酶含量,測(cè)定SchB對(duì)A375細(xì)胞黑色素生成,

6、結(jié)果表明SchB可降低A375細(xì)胞中黑色素的生成,與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4、SchB對(duì)UVB損傷模型中ROS的變化及其對(duì)UVB損傷模型的形態(tài)變化用DCFH-DA測(cè)定SchB對(duì)UVB損傷模型中ROS的變化,結(jié)果表明SchB可抑NUVB損傷模型中ROS的增多,且ROS生成量隨SchB濃度的增大而減少。將DCFH-DA作用于UVB損傷模型,通過激光共聚焦觀察UVB損傷模型細(xì)胞熒光變化,結(jié)果表明SchB可降低UVB損傷

7、模型中電子的外泄,與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5、SchB對(duì)UVB損傷模型中p53、bax、p21、caspase-3、cox-2、mmp-1,IL-10、IL-6、IL-18,tnf-a mRNA的影響用RT-PCR測(cè)定SchB對(duì)UVB損傷模型中p53、bax、p21、caspase-3、cox-2、mmp-1,IL-10、IL-6、IL-18,tnf-a mRNA的變化,結(jié)果表明SchB對(duì)UVB損傷模型中p21表

8、達(dá)影響不大,與對(duì)照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SchB可降低UVB損傷模型中p53、caspase-3、cox-2、mmp-1、IL-6、IL-18、IL-10,tnf-a mRNA表達(dá),且具有一定的濃度依賴性,與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6、Wstern-blot和免疫組化法測(cè)定SchB對(duì)UVB損傷模型中前膠原的影響通過Wstern-blot和免疫組化法觀察測(cè)定SchB對(duì)UVB損傷模型中前膠含量的變化,SchB對(duì)UV

9、B損傷模型中前膠原的變化,結(jié)果表明SchB可升高UVB損傷模型中前膠原含量,且隨著濃度的增高而升高,與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:SchB在體外可以抑制UVB對(duì)HaCaT,FB細(xì)胞的氧化損傷,提高UVB損傷模型中抗氧化物酶SOD,GSH-Px的含量,降低脂質(zhì)過氧化物MDA的產(chǎn)生,減少UVB損傷模型中ROS含量,可有效的抑制紫外線損傷。SchB降低了UVB損傷模型中凋亡基因及炎癥基因的表達(dá),如降低了p53,casp