五味子乙素干預(yù)二氧化硅致大鼠肺損傷的研究.pdf

1、目的：探討五味子乙素(SchisandrinB，Sch—B)對二氧化硅(SiO2)致肺損傷的干預(yù)作用及其作用機制。 方法：92只Wistar大鼠隨機分為對照組、染矽塵組、Sch—B干預(yù)Ⅰ組和Sch—B干預(yù)Ⅱ組。非暴露氣管法給大鼠氣管內(nèi)注射SiO2粉塵懸液，建立肺損傷模型，對照組給以等體積的生理鹽水。Sch—B干預(yù)Ⅰ組和Sch—B干預(yù)Ⅱ組分別在染塵后第一天、第八天開始灌胃給予Sch—B80mg/(kg·d)，連續(xù)21天。Sch—B

2、干預(yù)Ⅰ組藥后3、7、14和21d，Sch—B干預(yù)Ⅱ組藥后7、14和21d均隨機取6只，對應(yīng)各時間點隨機取對照組大鼠4只，染矽塵組6只，處死取其肺組織。測定肺系數(shù)；取右肺組織行常規(guī)HE染色，觀察肺組織病理學(xué)變化；免疫組織化學(xué)法檢測核轉(zhuǎn)錄因子—κB(nuclearFactor—kappaB，NF—κB)的核轉(zhuǎn)移率；紫外分光光度法測定左肺組織羥脯氨酸(hydroxyproline，HYP)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、還

3、原性谷胱甘肽(glutathione，GSH)含量和超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase，GSH—Px)活力；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT—PCR)測定腫瘤壞死因子—α(tumornecrosisfactor—alpha，TNF—α)，轉(zhuǎn)化生長因子(transformingGrowthfactor—beta1，TGF—β1)mRNA表達水平；Wes

4、ternblot法分析絲裂素活化蛋白激酶(mitogen—activatedproteinkinase，MAPK)家族中3個主要成員細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellularsignal—regulatedproteinkinase，ERKs)、c—Jun氨基末端激酶(c—JunNH2-terminalaminokinase，JNK)和p38活化表達的變化情況。 結(jié)果： 1．Sch—B對肺組織損傷的病理形態(tài)學(xué)有明

5、顯的改善作用，可以降低染矽大鼠的肺系數(shù)。 2．Sch—B可以降低肺組織HYP和MDA含量，維持GSH含量和SOD、GSH—px活力，與染矽塵組有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05或P＜0.01)。 3．Sch—B干預(yù)Ⅰ組各時間點大鼠肺組織TNF—αmRNA表達水平都高于對照組，在第7和14天與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)，在第21天與染矽塵組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。Sch—B干預(yù)Ⅱ組各時間點大鼠肺組織TNF—α

6、mRNA水平也都高于對照組，且有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)；在第14天高于染矽塵組，有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)，之后與染矽塵組表達水平相當(dāng)。 4．Sch—B干預(yù)Ⅰ組各時間點大鼠肺組織TGF—β1mRNA表達水平都高于對照組，基本呈下降趨勢，在第3天與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)，尚不能認(rèn)為與染矽塵組有統(tǒng)計學(xué)差異。Sch—B干預(yù)Ⅱ組各時間點大鼠肺組織TGF—β1mRNA水平也都高于對照組，且有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)

7、；在第14和28天高于染矽塵組，其中第14天有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。 5．Sch—B干預(yù)Ⅰ組大鼠肺組織NF—κB/P65核轉(zhuǎn)移率在整個實驗過程中呈直線上升趨勢發(fā)展，從第7天起與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)，在各時間點均低于染矽塵組(P＜0.01)；Sch—B干預(yù)Ⅱ組大鼠各時間點肺組織NF—κB/P65核轉(zhuǎn)移率高于對照組(P＜0.01)，在第21天低于染矽塵組(P＜0.01)，而在第28天高于染矽塵組(P＜0.01

8、)。 6．Sch—B干預(yù)Ⅰ組和Sch—B干預(yù)Ⅱ組各時間點大鼠肺組織ERKs蛋白的磷酸化程度都低于染矽塵組(P＜0.05或P＜0.01)；Sch—B干預(yù)Ⅰ組JNK1磷酸化程度在第7天達到最高峰后持續(xù)下降到低于染矽塵組(P＜0.01)，而Sch—B干預(yù)Ⅱ組各時間點JNK1磷酸化程度均低于染矽塵組(P＜0.01)；Sch—B干預(yù)Ⅰ組p38磷酸化程度第3天高于染矽塵組，第7天后低于染矽塵組，呈波浪形發(fā)展；Sch—B干預(yù)Ⅱ組p38磷酸化程

9、度不斷降低。 結(jié)論： 1．Sch—B對SiO2致大鼠肺損傷具有顯著的保護作用，能夠抑制SiO2粉塵誘導(dǎo)的肺纖維化，且在矽塵接觸早期和后期進行干預(yù)均有效果。 2．Sch—B進入機體后通過提高機體的抗氧化能力，對SiO2致大鼠肺損傷發(fā)揮保護作用。 3．Sch—B對染矽早期大鼠肺組織TNF—α和TGF—β1mRNA表達水平有一定的調(diào)節(jié)作用。對于SiO2誘導(dǎo)的肺損傷，在不同發(fā)病階段給予Sch—B干預(yù)，TNF—α和