五味子甲素、乙素對CYP3A和P-gp活性的影響及機制研究.pdf

1、目的：臨床實踐發(fā)現(xiàn)，合用五酯膠囊可以增加他克莫司血藥濃度，降低他克莫司服用量。五脂膠囊是華中五味子（北五味子）醇提法制備的有效成分混合物，五味子甲素、乙素是五味子的重要的藥理活性成分。國內(nèi)外對于五味子甲素、乙素與藥物相互作用機制的研究報道尚少，也不全面。本課題擬從體外、體內(nèi)兩方面，較全面的研究五味子甲素和乙素對 CYP3A和P-糖蛋白的作用，探討其對藥物代謝的影響，為臨床提供合用五酯膠囊用量的理論依據(jù)和用藥標準，減少或避免由于合用五味子

2、藥物而引起的其它藥物血藥濃度升高而導致的藥物不良反應。
　　方法：1.五味子甲素、乙素對細胞色素CYP3A的影響及機制研究，體外研究以大鼠肝微粒體酶為載體，通過體外溫孵法考察五味子甲素、乙素等對CYP3A的作用機制，采用HPLC法測定酶孵育體系中1′-羥基咪達唑侖的生成量，以1′-羥基咪達唑侖與空白對照組的百分率-log（SchA）及-log（SchB）擬合曲線求得IC50值以不同濃度的SchA、SchB的酶促動力學方程計算各自的

3、Vmax及 Km。2.體內(nèi)研究以咪達唑侖作為探針藥物，采用HPLC法測定血漿中1，-羥基咪達唑侖和咪達唑侖的濃度，用DAS2.0處理血藥濃度－時間數(shù)據(jù)，對主要藥動學數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。以1′-羥基咪達唑侖與咪達唑侖的AUC（0～3 h）比值及咪達唑侖的體內(nèi)清除率為指標考察不同給藥劑量下，五味子甲素、乙素對CYP3A的作用。3.五味子甲素、五味子乙素對 P糖蛋白的影響及機制研究，體外研究建立Caco-2細胞模型，通過雙向轉(zhuǎn)運實驗考察五味子甲

4、素、乙素等對 P-糖蛋白的影響，即首先通過 Papp值及 PDR值評價五味子甲素、乙素是否為Caco-2細胞轉(zhuǎn)運底物，然后測定這兩種試驗藥物對Caco-2細胞轉(zhuǎn)運同位素標記后的環(huán)孢素A影響。
　　結(jié)果：1. CYP3A體外微粒體試驗通過二次擬合計算出SchA及SchB的抑制常數(shù)（Ki），結(jié)果表明 SchA和SchB對肝微粒體的IC50分別為6.26μmol/ml、5.5μmol/ml，Ki分別為5.5μmol/ml、4.24μmo

5、l/ml，根據(jù)雙倒曲線擬合所在的象限區(qū)域可以判定 SchA和SchB對肝微粒體CYP3A的抑制作用屬于混合型抑制。2. CYP3A體內(nèi)代謝試驗結(jié)果表明3天單次給予五味子甲素低、中、高（8 mg/kg、16 mg/kg及32 mg/kg）使1′-羥基咪達唑侖與咪達唑侖的AUC（0～3 h）從1.25分別降至0.78、0.85、0.56，經(jīng)統(tǒng)計分析均有顯著差異（P<0.05），表明五味子甲素、乙素對CYP3A有顯著抑制作用，濃度依賴性不明顯

6、。同時測定灌胃后的大鼠肝微粒體活性常數(shù)Km，空白組、甲素低、中、高劑量組以及乙素中劑量組的Km值分別為14.53、17.53、18.03、20.29、21.46、18.9（μmol/ml），表明藥物灌胃后，CYP3A活性受到抑制，與探針底物親合性降低。3. P－糖蛋白細胞轉(zhuǎn)運實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)五味子甲素、乙素PDR值約等于1，不是此種細胞的轉(zhuǎn)運底物。
　　結(jié)論：在臨床上藥物的聯(lián)合運用中，五脂膠囊有可能影響經(jīng)P－糖蛋白吸收、經(jīng)細胞色素P4