A54多肽修飾氧化還原響應(yīng)型糖脂納米載體的構(gòu)建與評價.pdf

1、功能性納米給藥系統(tǒng)的設(shè)計與評價，旨在克服現(xiàn)有納米給藥系統(tǒng)穩(wěn)定性差、靶向性不足、不能有效釋放藥物等缺陷，近年來已成為藥劑學(xué)領(lǐng)域研究的熱點之一。本研究利用腫瘤細胞內(nèi)外還原型谷胱甘肽(GSH)的濃度差異（100～1000倍），以及腫瘤細胞與正常細胞之間的濃度差異（7～10倍），設(shè)計得到還原敏感型的糖脂納米載體(CSO-ss-SA)，并進一步構(gòu)建A54多肽修飾聚乙二醇(PEG)化的還原敏感型糖脂納米載體(A54-PEG-CSO-ss-SA)。A

2、54多肽經(jīng)PEG鏈接修飾的嫁接物膠束，可延長體內(nèi)循環(huán)時間，提高嫁接物膠束的腫瘤組織靶向分布。二硫鍵作為糖脂間的橋鏈，特異性響應(yīng)腫瘤組織內(nèi)環(huán)境較高的GSH濃度，發(fā)生二硫鍵斷裂，迅速釋放藥物，正常組織內(nèi)無GSH濃度的響應(yīng)性，釋放藥物少，可實現(xiàn)納米給藥系統(tǒng)的高效安全治療。
　　本研究以3，3-二硫代二丙酸作為交聯(lián)劑，合成二硫鍵糖脂嫁接物(CSO-ss-SA)，采用碳二亞胺(EDC)偶聯(lián)法、N，N'-二琥珀酰亞胺基碳酸酯(DSC)為鏈橋，

3、合成A54-PEG-CSO-ss-SA。A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物可在水性介質(zhì)中自聚集形成膠束，其數(shù)均粒徑為50.83±10.4 nm，分布均勻，臨界膠束濃度為54.9μg/mL。以阿霉素(DOX)為模型藥物，經(jīng)透析法制備嫁接物載藥納米粒(A54-PEG-CSO-ss-SA/DOX)，其數(shù)均粒徑為48.36±4.3 nm，包封率為77.92％，在10mMGSH濃度條件下，快速釋放包封藥物DOX。體外細胞攝取實驗結(jié)果表明，A

4、54多肽修飾的納米載體，可加快BEL-7402細胞攝取，增加細胞內(nèi)的藥物濃度。以尼羅紅(NR)為模型藥物，二硫鍵鏈接的糖脂納米載體（A54-PEG-CSO-ss-SA）細胞內(nèi)釋放速率明顯大于非二硫鍵鏈接的糖脂納米載體(A54-PEG-CSO-SA)。A54-PEG-CSO-ss-SA/DOX的IC50值為1.34±0.58μg/mL，明顯低于CSO-ss-SA/DOX及非敏感對照A54-PEG-CSO-SA/DOX給藥系統(tǒng)的IC50值，

5、藥物細胞毒性提高了0.6～1.0倍。
　　以荷BEL-7402瘤裸鼠為模型動物，A54-PEG-CSO-ss-SA/DiR體內(nèi)分布結(jié)果表明，A54多肽的修飾能夠顯著增加嫁接物膠束在腫瘤部位的分布，且能夠維持較長時間。FITC標記納米載體，以NR為模型藥物，體內(nèi)藥物釋放結(jié)果表明，A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物膠束能夠特異性響應(yīng)腫瘤組織內(nèi)較高GSH濃度，快速釋放藥物，而肝臟組織內(nèi)基本無藥物釋放;心臟組織切片的熒光照片顯示，A

6、54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物膠束在心臟組織內(nèi)未見有明顯分布。模型動物藥效學(xué)研究結(jié)果顯示，等劑量的A54-PEG-CSO-ss-SA/DOX嫁接物載藥納米粒，其療效與市售阿霉素制劑相當，其正常組織內(nèi)游離藥物濃度，以及心臟組織內(nèi)藥物分布，均明顯低于市售制劑，具有較高的安全性。
　　本研究結(jié)果表明，A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物膠束具有較好的BEL-7402肝癌組織靶向性，在靶細胞內(nèi)快速釋放藥物，提高藥物療效。同時，