氧化還原響應性糖脂納米遞釋系統(tǒng)的構建與評價.pdf

1、納米給藥系統(tǒng)在腫瘤治療中的應用發(fā)展迅速，但仍存在藥物泄露、載藥量低、靶向性不足等缺陷，因此有關智能型藥物遞釋系統(tǒng)的設計已逐漸成為藥劑學領域的研究熱點之一。環(huán)境響應性藥物遞釋系統(tǒng)可針對腫瘤與正常組織的生理差異，將包封的藥物選擇性地富集于腫瘤組織，實現(xiàn)靶部位的環(huán)境響應性藥物遞釋，提高抗腫瘤療效并降低毒副作用。利用腫瘤細胞內(nèi)外還原型谷胱甘肽(GSH)的濃度差異（100～1000倍），以及腫瘤細胞與正常細胞之間的濃度差異（7～10倍），本研究旨

2、在構建一種選擇性響應腫瘤細胞內(nèi)外氧化還原電位差的智能型藥物載體，實現(xiàn)藥物高效安全遞釋。本研究主要內(nèi)容包括：
　　⑴以二硫鍵為橋鏈，以殼聚糖為親水鏈、硬脂胺為疏水鏈，兩步法合成具有氧化還原響應性的糖脂嫁接物CSO-ss-SA。 CSO-ss-SA可在水性介質(zhì)中自聚集，形成類球形膠束，粒徑小于100nm。能夠在10mM GSH還原條件下發(fā)生膠束解聚，具有典型的還原敏感性。以紫杉醇(PTX)為模型藥物，透析法制備藥物遞釋系統(tǒng)（載藥納米粒

3、，CSO-ss-SA/PTX），載藥量較高(～27％，w/w)，可在10mM GSH還原條件下，快速釋放所包封的PTX。體外細胞攝取結果表明，CSO-ss-SA嫁接物膠束能夠被細胞快速攝取。以尼羅紅為模型藥物，分別與腫瘤細胞、正常細胞共孵育12h，證實載藥納米?？身憫禺愋阅[瘤細胞內(nèi)的氧化還原電位，實現(xiàn)藥物的高效釋放，而在正常細胞內(nèi)基本不釋放藥物。CSO-ss-SA/PTX的IC50值，分別為陽性對照泰素和非敏感糖脂嫁接物（CSO-SA

4、）載藥納米粒的7.55％和13.2％，且與細胞內(nèi)谷胱甘肽濃度呈負相關。以荷瘤裸鼠為模型動物，證實嫁接物膠束具有腫瘤被動靶向性，能特異性響應腫瘤組織及細胞內(nèi)高濃度的還原條件，在12h內(nèi)快速釋藥，且保持在正常組織內(nèi)72h內(nèi)基本不釋放狀態(tài)。模型動物抗腫瘤藥效結果表明，載藥納米粒抑瘤率為88.4％，明顯高于陽性對照的抑瘤率59.4％。
　?、茦嫿嘶贑SO-ss-SA嫁接物膠束的共遞釋系統(tǒng)，分別用于遞釋PTX和小分子干擾RNA(siRN

5、A)。含陽離子的CSO-ss-SA嫁接物膠束，可有效密接siRNA，并在10mM GSH還原條件下快速釋放所密接的siRNA。嫁接物能有效遞釋siRNA至腫瘤細胞，具有內(nèi)-溶酶體逃逸功能。通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移及分子信標技術證實，嫁接物可特異性響應細胞內(nèi)氧化還原電位差而釋放出siRNA，并實現(xiàn)了有效的沉默細胞內(nèi)靶基因表達(85.8％)。以腫瘤細胞及其耐藥細胞為模型細胞，CSO-ss-SA嫁接物膠束包封PTX并同時密接特異性針對B細胞淋巴瘤

6、(Bcl-2)靶序列的siRNA，共遞釋系統(tǒng)主要通過高效的細胞周期協(xié)同阻滯效應，實現(xiàn)協(xié)同增效治療，并體現(xiàn)出克服耐藥作用。
　　⑶為減少網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，進一步提高抗腫瘤療效，本文構建了PEG化的二硫鍵糖脂嫁接物(PEG-CSO-ss-SA)作為基因治療載體，應用于pDNA的遞釋。PEG-CSO-ss-SA膠束可有效密接pDNA，并保護pDNA免受核酶降解，可響應10mM GSH還原條件，快速釋放所密接的DNA。PEG的表面修飾明顯

7、降低巨噬細胞的吞噬，使嫁接物膠束的腫瘤細胞攝取速率略有降低，并能有效轉(zhuǎn)染腫瘤細胞，其轉(zhuǎn)染效率與陽性對照脂質(zhì)體相當。PEG-CSO-ss-SA嫁接物膠束可遞釋表達野生型p53質(zhì)粒，有效上調(diào)細胞內(nèi)p53表達，并誘導腫瘤細胞凋亡，且其誘導凋亡的能力與細胞內(nèi)谷胱甘肽濃度呈正相關。體內(nèi)研究表明，PEG修飾后可延長嫁接物膠束在體內(nèi)的循環(huán)時間，增加其在腫瘤部位的蓄積。尾靜脈注射PEG-CSO-ss-SA密接p53質(zhì)粒復合物，可檢測到腫瘤內(nèi)質(zhì)粒表達，并