銀杏葉提取物對誘導型一氧化氮合酶在內皮細胞表達的抑制作用.pdf

1、目的：探討銀杏葉提取物對誘導型一氧化氮合酶的抑制作用及對血管內皮細胞保護作用的機制。
　　材料與方法：體外培養(yǎng)人內皮細胞 ECV304細胞，應用RPMI-1640培養(yǎng)液，分別培養(yǎng)加入不同濃度的銀杏葉提取物的細胞和空白組細胞。在培養(yǎng)細胞2小時和4小時后，分別測定一氧化氮代謝產物的量；通過免疫印跡分析NOS蛋白的表達；運用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）分析mRNA水平。
　　結果：(1)銀杏葉提取物對內皮細胞的作用不依賴于細

2、胞內鈣離子濃度的變化。經過銀杏葉提取物預處理的細胞，培養(yǎng)2小時后，對人內皮細胞釋放 NO代謝物的量無明顯影響。經過銀杏葉提取物處理的細胞孵育后4小時，NO代謝產物釋放到培養(yǎng)基中的數(shù)量顯著減少。通過各種濃度的銀杏葉提取物孵育的細胞4小時，并測定NO釋放到培養(yǎng)基的量。銀杏葉提取物抑制內皮細胞NO代謝產物的釋放呈濃度依賴性的關系。在培養(yǎng)基中加入的鈣離子載體沒有改變銀杏葉提取物對血管內皮細胞釋放一氧化氮的抑制作用。(2)在銀杏葉提取物處理的細胞

3、中NOS活性降低可能由于酶蛋白的降低。在Western blotting結果顯示，經過50μg/ml和100μg/ml銀杏葉提取物處理的細胞中的iNOS蛋白水平分別降低27％和43%。(3)經銀杏葉提取物處理過的細胞iNOS蛋白水平降低可能是由于mRNA表達受到影響。經過銀杏葉提取物處理過的細胞，與對照比相比，iNOS與β-actin比值從0.22分別降低到0.16和0.14.具有統(tǒng)計學意義.
　　結論：
　　1.銀杏葉提取