鼠神經(jīng)生長因子(NGF)對大鼠腦出血后IL-6、SOCS-3表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過建立大鼠腦出血(ICH)模型，探討鼠神經(jīng)生長因子(NGF)對大鼠腦出血后IL-6、SOCS-3表達的影響，及可能的保護作用機制。
　　方法：⑴采用非肝素化自體鼠尾血注入法建立大鼠尾狀核腦出血模型。⑵將80只健康雄性SD大鼠隨機分為四組:假手術組（Sham組）（5只），腦出血組（ICH組）(25只)，小劑量鼠神經(jīng)生長因子治療組[NGF(S)組]（25只），大劑量鼠神經(jīng)生長因子治療組[NGF(L)組]（25只）。假手術組大鼠

2、只設術后6h時間點，實驗只插針不注入自體血，將ICH組、NGF(S)組和NGF(L)組按時間點各分為術后6h、24h、2d、3d、5d共5個亞組，每個亞組各5只大鼠。⑶給藥方法:大鼠腦出血模型建立30分鐘后，NGF大小劑量用藥組，NGF(S)組3ug/kg，NGF(L)組18ug/kg，以常規(guī)劑量首次加倍腹腔注射給藥，以后每天同一時間按常規(guī)劑量給藥。Sham組和ICH組大鼠于相同時間點腹腔注射等量的生理鹽水。⑷于術后2h進行造模成功評價

3、，并對術后各時間點進行神經(jīng)功能評分，采用干濕重法測定血腫周圍腦組織含水量，HE染色法觀察血腫周圍腦組織炎癥反應及病理學改變情況，免疫組化法及圖像分析技術觀察血腫周圍腦組織IL-6及SOCS-3陽性細胞的表達情況，TUNEL染色及圖像分析技術觀察血腫周圍腦組織細胞凋亡程度。
　　結果：①行為學評分:Sham組大鼠術后沒有出現(xiàn)明顯神經(jīng)功能障礙;ICH組及NGF組大鼠腦出血術后各時間點神經(jīng)功能評分均低于Sham組(P＜0.05);ICH

4、組、NGF(S)組及NGF(L)組在腦出血術后6h、24h、5d各時間點與2d時間點比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);NGF(S)組在腦出血術后24h、2d、3d、5d時間點神經(jīng)功能評分與ICH組比較，差異具有顯著性(P＜0.05)。NGF(L)組術后神經(jīng)功能評分在各對應時間點均高于ICH組及NGF(S)組(P＜0.05)，其中與腦出血組比較差異更顯著。②腦組織含水量:ICH組和NGF組大鼠腦出血術后不同時間點血腫周圍腦組織含水量

5、均明顯高于Sham組(P＜0.05);ICH組、NGF組腦出血術后6h、24h、5d各時間點與2d比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);NGF(S)組在24h、2d、3d、5d各時間點腦組織含水量均低于ICH組(P＜0.05);NGF(L)組術后各時間點腦組織含水量均低于ICH組及NGF(S)組(P＜0.05);其中與腦出血組比較差異更顯著(P＜0.05)。③炎癥反應及病理學改變:Sham組可見針孔周圍腦組織結構清晰完整，細胞形態(tài)結構完好，

6、神經(jīng)元排列整齊，未見明顯神經(jīng)細胞水腫及炎性細胞浸潤;腦出血術后ICH組和NGF組可見炎性細胞浸潤，腦細胞水腫，呈空泡樣變性，細胞核固縮溶解，細胞及血管周圍間隙增寬，間質內見炎性細胞浸潤及神經(jīng)膠質細胞增生，染色質密度增加，伊紅著色深。2-3d炎癥反應及病理改變達到高峰，之后逐漸減輕;與ICH組比較，NGF組各相應時間點炎癥反應程度和病理改變減輕，其中NGF(L)組對炎癥反應和病理改變的改善更為顯著。④IL-6陽性細胞表達變化:Sham組大

7、鼠術后僅有少量IL-6陽性細胞表達;腦出血術后ICH組及NGF組的IL-6陽性細胞表達均多于Sham組(P＜0.05);ICH組、NGF組在腦出血術后6h、24h、3d、5d各時間點IL-6陽性細胞表達與2d時間點比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);NGF(S)組在腦出血術后各時間點與ICH組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);NGF(L)組術后各時間點IL-6陽性細胞表達均低于ICH組及NGF(S)組(P＜0.05)。⑤SOC

8、S-3陽性細胞表達變化:Sham組大鼠術后僅有少量SOCS-3陽性細胞表達;腦出血術后ICH組及NGF組在各時間點分別與Sham組比較，SOCS-3陽性細胞表達均明顯增多(P＜0.05);ICH組、NGF組在腦出血術后6h、24h、5d各時間點SOCS-3陽性細胞表達與2d時間點比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);NGF(S)組在腦出血術后各時間點SOCS-3陽性細胞表達數(shù)與ICH組比較均增加(P＜0.05);NGF(L)組術后各時

9、間點SOCS-3陽性細胞表達均高于ICH組及NGF(S)組(P＜0.05);其中與腦出血組比較差異更顯著(P＜0.05)。⑥血腫周圍腦組織細胞凋亡程度比較:TUNEL染色觀察Sham組未見明顯凋亡細胞表達;ICH組和NGF組在腦出血術后血腫周圍均有不同程度的細胞凋亡，ICH組、NGF組分別與Sham組在腦出血術后相應時間點細胞凋亡情況比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);ICH組與NGF組凋亡細胞表達情況在術后6h、24h、3d、5

10、d各時間點與2d時間點比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);NGF(S)組與ICH組各對應時間點細胞凋亡程度比較均降低(P＜0.05);NGF(L)組與ICH組、NGF(S)各相應時間點凋亡細胞數(shù)比較均降低(P＜0.05)，其中與腦出血組比較差異更明顯。
　　結論：⑴自體鼠尾血注入法是腦出血研究的理想動物模型，其導致的生理和病理改變與人體腦出血相一致。⑵腦出血后可出現(xiàn)明顯腦水腫及腦組織炎癥反應和細胞凋亡，從而加重神經(jīng)功能障礙。⑶