慢性擠壓傷后鼠神經(jīng)生長因子對(duì)鼠腰脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)AQP-2表達(dá)影響的研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　鼠神經(jīng)生長因子(mNGF)分子量約為26．5×103，它是一種大分子蛋白質(zhì)，具有生物活性，mNGF最初是在小鼠頜下腺中提取而獲得的，它具有營養(yǎng)人類正常細(xì)胞的作用，在神經(jīng)損傷后，尤其是對(duì)外周神經(jīng)具有促進(jìn)恢復(fù)和再生的作用，目前在臨床上已被廣泛用于治療中樞及外周神經(jīng)損傷，并且獲得了比較理想的的臨床療效。腰脊神經(jīng)節(jié)與神經(jīng)根相鄰，該部位是感覺神經(jīng)的胞體集中區(qū)域，當(dāng)炎癥或者外來暴露對(duì)其造成損傷后，患側(cè)肢體會(huì)出現(xiàn)感覺功能的

2、異常。隨著人類年齡增長，腰椎會(huì)逐漸發(fā)生退行性的改變，如椎間盤突出，椎管狹窄等，這些退變?？蓪?dǎo)致腰脊神經(jīng)節(jié)(Dorsal root ganglion,DRG)的損傷，因此腰脊神經(jīng)節(jié)損傷后的修復(fù)對(duì)臨床具有重要的意義。本研究中利用結(jié)扎實(shí)驗(yàn)大鼠的坐骨神經(jīng)來模擬建立腰脊神經(jīng)節(jié)損傷的動(dòng)物模型，通過鼠神經(jīng)生長因子（mNGF）的治療來研究其在腰脊神經(jīng)節(jié)慢性損傷后促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)的作用，并研究其對(duì)脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)水通道蛋白-2（AQP-2）含量變化的影響，了解

3、臨床治療過程中脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)分子水平的變化情況，為治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　選取健康雄性成年SD大鼠90只，體重200-250g，將這90只實(shí)驗(yàn)鼠隨機(jī)分為三組，假手術(shù)組，手術(shù)組，mNGF治療組，每組平均30只，在假手術(shù)組中將大鼠左側(cè)坐骨神經(jīng)給予暴露，不給予結(jié)扎；手術(shù)組暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)，在距神經(jīng)起始處附近用4．0含鉻羊腸線結(jié)扎坐骨神經(jīng)4道，每道間隔約1-2 mm，被結(jié)扎的神經(jīng)長約4．5 mm，然后逐層縫合，mNGF組處理

4、同手術(shù)組，三組分別于手術(shù)前，術(shù)后第3天，7天，14天行熱縮足潛伏期、及機(jī)械縮足反應(yīng)閾測試。并與術(shù)后第3天，第7天，和第14天對(duì)三個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的部分大鼠進(jìn)行處死并留取脊神經(jīng)節(jié)標(biāo)本，然后對(duì)標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色觀察脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)神經(jīng)元染色情況，Western blot分析來定量分析AQP-2量。
　　結(jié)果：
　　1行為學(xué)測試
　　術(shù)后3天三組間熱縮足潛伏期分別為13.5±0.6s,5.4±0.3s,6.4±0.4s，第7天分別

5、為13.5±0.6s，5.8±0.3s，8.3±0.7s，第14天分別為13.3±0.6s，5.8±0.3s，10.7±0.8s；術(shù)后第3天、7天、14天三組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。術(shù)后3天三組間機(jī)械縮足反應(yīng)閾分別為34.3±1.3s,15.9±0.8s,22.5±0.8s，第7天分別為34.3±0.9s，15.9±1.0s，24.8±0.8s，第14天分別為34.3±0.5s，15.6±0.6s，28.6±1.3s；術(shù)后

6、第3天、7天、14天三組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2免疫組化染色
　　假手術(shù)組的脊神經(jīng)節(jié)免疫組化染色術(shù)后第3天，第7天，第14天染色較淺，隨時(shí)間增長染色變化不大；手術(shù)組于術(shù)后第3天進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色可見大量點(diǎn)狀的DRG細(xì)胞被染成棕黃色，隨著時(shí)間增長，在第7天，第14天，陽性細(xì)胞染色變化不大；mNGF組于術(shù)后3天和第7天染色程度與手術(shù)組相差不大，第14天可見染色細(xì)胞數(shù)明顯減少，染色變淺。
　　3 We

7、stern blot分析
　　分別與術(shù)后3天，7天，14天對(duì)假手術(shù)組，手術(shù)組，以及mNGF組脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)AQP-2表達(dá)量行定量分析，結(jié)果以積分光密度(IOD)值的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，術(shù)后3天假手術(shù)組與手術(shù)組和mNGF組分別為328±20,2744±77,2173±110，三組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ P＜0.05），術(shù)后第7天三組 IOD值分別為323±16,2299±93,1664±54、三組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），術(shù)后第14天三