基于補(bǔ)腎益精法復(fù)方的黃芪甲苷對(duì)硬皮纖維化的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　觀察基于補(bǔ)腎益精法中藥復(fù)方的黃芪甲苷對(duì)系統(tǒng)性硬皮病成纖維細(xì)胞的影響，并通過(guò)測(cè)量成纖維細(xì)胞Collagen I，F(xiàn)ibronectin、Smad3、Flil及其mRNA的變化來(lái)進(jìn)一步闡明硬皮病的發(fā)病機(jī)理，探索硬皮病治療新的干預(yù)靶點(diǎn)，為現(xiàn)代硬皮病治療提供新的思路和途徑。
　　方法:
　　體外層面，分離、培養(yǎng)來(lái)自系統(tǒng)性硬皮病患者皮損和健康人對(duì)應(yīng)部位的皮膚原代成纖維細(xì)胞，用補(bǔ)腎益精法復(fù)方含藥血清、黃芪甲苷、PBS溶

2、液分別處理兩組細(xì)胞，采用Western Blot技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞Collagen I，F(xiàn)ibronectin，Smad3與Fli1蛋白表達(dá)水平，RT-PCR檢測(cè)Collagen I，F(xiàn)ibroneetin，Smad3與Fli1的mRNA表達(dá)，免疫熒光技術(shù)檢測(cè)Smad3的活性與定位的調(diào)節(jié)。體內(nèi)層面，用博萊霉素誘導(dǎo)的硬皮病小鼠模型采用同樣方法進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)行病理組織切片、染色，觀察小鼠皮膚病理變化，評(píng)價(jià)效果。
　　結(jié)果:
　

3、　1.成功建立硬皮病小鼠模型:與正常對(duì)照組相比，硬皮病模型組中CollagenI、Fibronectin的mRNA均增加(p＜0.05);與硬皮病模型組相比，補(bǔ)腎益精法中藥復(fù)方、黃芪甲苷干預(yù)的硬皮病小鼠的CollagenI、Fibronectin的mRNA均降低(p＜0.05)。
　　2.成功構(gòu)建硬皮病成纖維細(xì)胞系:和NF相比，SScF中CollagenI、Fibronectin的mRNA均增加(p＜0.05);和SScF相比，不

4、同濃度干預(yù)的SScF的CollagenI、Fibronectin的mRNA均降低(p＜0.05)。
　　3.和NF相比，SScF中Fli1的mRNA的表達(dá)明顯降低(p＜0.05);和SScF相比，經(jīng)不同濃度的黃芪甲苷干預(yù)的SScF的Fli1的mRNA上調(diào)(p＜0.05)。
　　4.與NF相比，Smad3在硬皮病成纖維細(xì)胞中經(jīng)補(bǔ)腎益精法中藥復(fù)方及黃芪甲苷干預(yù)前后變化不明顯(p＞0.05);P-Smad3顯著增加，黃芪甲苷干預(yù)的