RNA干擾IL-17基因?qū)Π⒚顾啬I病大鼠Th17-Treg細胞平衡及足細胞病變的影響.pdf

1、目的：探討沉默IL-17基因?qū)h17細胞及其主要效應性細胞因子IL-17、Treg細胞及其特異性轉(zhuǎn)錄因子 Foxp3、以及腎組織足細胞特征性分子Nephrin和Podocalyxin表達及蛋白尿的影響。方法：建立阿霉素腎病SD大鼠作為模型組，并設置正常組，將重組表達質(zhì)粒IL-17-shRNA和陰性對照質(zhì)粒shNC采用慢病毒介導法分別轉(zhuǎn)染至阿霉素腎病 SD大鼠模型作為轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染陰性組，篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染動物，采用CBB法測定蛋白尿，流式細

2、胞術(shù)檢測SD大鼠外周血Th17/Treg細胞比例,實時定量PCR（q-PCR）檢測Th17細胞主要效應性細胞因子 IL-17和 Treg細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子 Foxp3基因的mRNA表達變化，q-PCR和 Western blot檢測 SD大鼠腎組織足細胞特征性分子 Nephrin和Podocalyxin的mRNA和蛋白表達水平；應用免疫組化法驗證SD大鼠腎組織足細胞特征性分子Nephrin和Podocalyxin蛋白的表達差異，電子顯微

3、鏡觀察SD大鼠腎臟腎小球超微結(jié)構(gòu)的改變。結(jié)果:（1）模型組較正常組，蛋白尿及外周血Th17細胞比例升高（P＜0.05），Treg細胞比例下降（P＜0.05），IL-17基因mRNA表達水平上調(diào)（P＜0.05），F(xiàn)oxp3基因的mRNA表達水平下調(diào)（P＜0.05），足細胞特征性分子Nephrin和Podocalyxin的mRNA和蛋白表達水平降低（P＜0.05），電子顯微鏡下腎小球基底膜增厚和系膜基質(zhì)增生、電子致密物沉積、上皮細胞足突彌漫

4、融合。（2）轉(zhuǎn)染組較模型組和陰性組，蛋白尿及外周血 Th17細胞比例降低（P＜0.05），Treg細胞比例升高（P＜0.05），IL-17基因的mRNA表達水平下調(diào)（P＜0.05），F(xiàn)oxp3基因的mRNA表達水平上調(diào)（P＜0.05），足細胞特征性分子 Nephrin和 Podocalyxin的mRNA和蛋白表達水平升高（P＜0.05），電子顯微鏡下腎小球基底膜厚薄基本正常、系膜基質(zhì)輕度增生、僅少量電子致密物沉積，局部有足突融合。模型組