七氟醚早期暴露對(duì)L型Ca2+通道活性的抑制及rTMS調(diào)控的研究.pdf

1、目的：
　　七氟醚是臨床常用的吸入性麻醉劑，七氟醚早期暴露是否會(huì)抑制大腦的早期發(fā)育是臨床麻醉關(guān)注的熱點(diǎn)。重復(fù)經(jīng)顱磁刺激（rTMS）是一種無(wú)創(chuàng)調(diào)控神經(jīng)活動(dòng)的技術(shù)。本論文的研究目的是從 L型Ca2+通道活性角度研究大鼠七氟醚早期暴露對(duì)大腦發(fā)育的抑制、以及 rTMS對(duì)大腦發(fā)育的調(diào)控作用，論文的研究為rTMS調(diào)控嬰幼兒麻醉對(duì)大腦早期發(fā)育提供支持。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
　　Sprague-Dawley（SD）

2、大鼠隨機(jī)分成三組，每組再分為1w-5w。正常組（con1w, con2w, con3w, con4w, con5w）,七氟醚組（sevo1w, sevo2w, sevo3w, sevo4w, sevo5w）和重復(fù)經(jīng)顱磁刺激組（rTMS2w, rTMS3w, rTMS4w, rTMS5w）。
　　2.早期七氟醚暴露模型的制備
　　將出生后1w的大鼠放到有機(jī)玻璃麻醉箱內(nèi)，調(diào)節(jié)七氟醚的濃度至3％，連續(xù)暴露6小時(shí)。con組1w的大鼠

3、暴露于100%氧氣中6小時(shí)。
　　3.施加rTMS
　　對(duì)七氟醚模型大鼠施加低頻（1Hz）rTMS，連續(xù)7天，每天1次，一共20個(gè)串，每串20個(gè)刺激脈沖，共400個(gè)刺激脈沖。
　　4.大鼠海馬腦片CA1區(qū)錐體神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)
　　用乙醚將大鼠麻醉后，迅速斷頭取腦，放到0-4℃的人工腦脊液里冰凍1-2分鐘。然后用振動(dòng)切片機(jī)將腦組織切成400μm左右的腦片。迅速將腦片放到通有95% O2+5% CO2混合氣的人工腦脊液

4、中孵育不少于1小時(shí)，保持室內(nèi)溫度25-26℃。
　　5.數(shù)據(jù)記錄分析和統(tǒng)計(jì)
　　應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，記錄以上各組腦片海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)細(xì)胞的L型Ca2+通道電流，應(yīng)用Clamfit10分析L型Ca2+通道的動(dòng)力學(xué)特性，應(yīng)用單因素方差分析方法計(jì)算各組之間的差異。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠發(fā)育早期1w-5w大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)細(xì)胞的L型Ca2+通道特性
　　L型Ca2+通道的最大電流密度隨著大鼠周齡的增

5、加而逐漸增加，其中，con2w和con3w的最大電流密度分別是（pA/pF）：-6.75±0.44，-12.58±0.71，有顯著性差異（n=10，P<0.01）。con1w和con2w，con3w和con4w，con4w和con5w，最大電流密度沒(méi)有顯著性差異（n=10, P>0.05）。
　　和con1w相比，con2w半數(shù)激活電壓顯著降低（n=10, P<0.05），和con2w相比，con3w半數(shù)激活電壓顯著降低（n=10

6、, P<0.05）。con3w和con4w，con4w和con5w，半數(shù)激活電壓之間沒(méi)有顯著性差異（n=10, P>0.05）。con1w和con2w， con2w和con3w，con3w和con4w，con4w和con5w，斜率因子之間沒(méi)有顯著性差異（n=10, P>0.05）。
　　con1w和con2w，con2w和con3w，con3w和con4w，con4w和con5w，通道的半數(shù)失活電壓和斜率因子之間均沒(méi)有顯著性差異（

7、n=10, P>0.05）。
　　2.早期七氟醚暴露抑制大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)細(xì)胞的L型Ca2+通道活性
　　和con1w相比，sevo1w的L型Ca2+通道電流密度降低了39.28%（n=10, P<0.01）。和con2w相比，sevo2w的L型Ca2+通道電流密度降低29.86%（n=10, P<0.05）。和con3w相比，sevo3w的L型Ca2+通道電流密度降低18.40%（n=10, P<0.05）。con4

8、w和sevo4w，con5w和sevo5w，電流密度之間沒(méi)有顯著性差異（n=10, P>0.05）。
　　和con1w相比，sevo1w的半數(shù)激活電壓增加（n=10, P<0.01）。和con2w相比，sevo2w的半數(shù)激活電壓增加（n=10, P<0.05）。sevo3w和con3w，sevo4w和con4w，sevo5w和con5w，半數(shù)激活電壓之間沒(méi)有顯著性差異（n=10, P>0.05）。sevo1w和con1w，sevo

9、2w和con2w， sevo3w和con3w，sevo4w和con4w，sevo5w和con5w，斜率因子之間沒(méi)有顯著性差異（n=10, P>0.05）。
　　和con1w相比，sevo1w半數(shù)失活電壓顯著降低（n=10, P<0.01）。和con2w相比，sevo2w半數(shù)失活電壓顯著降低（n=10, P<0.05）。和con3w相比，sevo3w半數(shù)失活電壓顯著降低（n=10, P<0.05）。sevo4w和con4w，sevo

10、5w和con5w，半數(shù)失活電壓之間沒(méi)有顯著性差異（n=10, P>0.05）。和con1w相比，sevo1w的斜率因子顯著降低（n=10, P<0.05）。sevo2w和con2w， sevo3w和con3w，sevo4w和con4w，sevo5w和con5w，斜率因子之間沒(méi)有顯著性差異（n=10, P>0.05）。
　　3. rTMS提高大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)細(xì)胞的L型Ca2+通道活性
　　和sevo2w相比，rTMS2

11、w的L型Ca2+通道電流密度增加（n=10, P<0.05）。和sevo3w相比，rTMS3w的L型Ca2+通道電流密度增加（n=10, P<0.05）。rTMS4w和sevo4w，rTMS5w和sevo5w，最大電流密度之間沒(méi)有顯著性差異（n=10, P>0.05）。
　　和sevo2w組相比， rTMS2w的半數(shù)激活電壓降低（n=10, P<0.05）。rTMS3w和sevo3w，rTMS4w和sevo4w，rTMS5w和se

12、vo5w，半數(shù)激活電壓之間沒(méi)有顯著性差異（n=10, P>0.05）。rTMS2w和sevo2w，rTMS3w和sevo3w，rTMS4w和sevo4w，rTMS5w和sevo5w，斜率因子之間沒(méi)有顯著性差異（n=10, P>0.05）。
　　和sevo2w相比，和 rTMS2w的半數(shù)失活電壓升高（n=10, P<0.05），rTMS3w和sevo3w，rTMS4w和sevo4w，rTMS5w和sevo5w，半數(shù)失活電壓沒(méi)有顯著性

13、差異（n=10, P>0.05）。rTMS2w和sevo2w，rTMS3w和sevo3w，rTMS4w和sevo4w，rTMS5w和sevo5w，斜率因子之間沒(méi)有顯著性差異（n=10, P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. con1w-5w大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)細(xì)胞的L型Ca2+通道電流隨著大鼠周齡的增加而增加，2w和3w之間的電流有顯著性增加，表明海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)細(xì)胞L型Ca2+通道發(fā)育的關(guān)鍵期是2w到3w。