小體積肝移植術后早期腎功能損傷及七氟醚麻醉的保護作用.pdf

1、研究背景:
　　 急性腎功能損傷是肝移植術后常見的并發(fā)癥,有很多因素引起腎功能損傷,但小體積肝移植中引起的門靜脈高壓是否加劇腎功能損傷以及是否影響腎內(nèi)血管阻力,目前仍不清楚；七氟醚是臨床上廣泛應用的麻醉藥,在動物實驗和細胞培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)七氟醚對腎臟有保護作用,但七氟醚對小體積肝移植術后腎功能的影響尚無研究。本實驗通過建立大鼠肝移植模型,研究不同供肝體積對再灌注早期門靜脈壓力的影響,門靜脈高壓對腎功能和腎內(nèi)血管阻力的影響以及七氟醚麻醉

2、對大鼠小體積肝移植術后腎功能的影響和相關機理。
　　 材料與方法:
　　 Ⅰ.不同供肝體積的大鼠肝移植的早期腎功能損傷。
　　 將大鼠隨機分為3組,假手術組(不進行肝移植,其他操作相同)6只,50％供肝體積肝移植組(50％肝移植組,50％LT group)和全肝肝移植組(對照組,100％LTgroup)各18對大鼠,6只測定門靜脈壓力和平均壓；再灌注后30min,2h抽腹主動脈血,其中2ml用于檢查谷丙轉氨酶(A

3、LT,谷草轉氨酶(AST)和肌酐(sCr)。另外3ml高速離心后保存血清,用ELISA法監(jiān)測TNFα,IL-6,NGAL,半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(Cys)。每一時間點取血動物為6只(n=6),同時斷頭處死,取腎組織,蛋白裂解后測MPO,MDA；另制作腎組織切片,觀察腎臟組織的損傷情況。
　　 Ⅱ.肝移植過程中腎內(nèi)動脈阻力指數(shù)的變化。
　　 將大鼠隨機分為4組,假手術組(不進行肝移植,其他操作相同)6只；無肝期組(只測定門

4、靜脈、下腔靜脈阻斷10min,15min的右腎內(nèi)動脈血流流速及動脈阻力指數(shù))6只；50％供肝體積肝移植組(50％LT group)和全肝肝移植組(100％LT group)各6對大鼠,觀察新肝早期的右腎內(nèi)動脈血流流速及動脈阻力指數(shù)。
　　 Ⅲ.大鼠小體積肝移植中七氟醚麻醉對腎功能的保護作用及機理的研究。
　　 將大鼠隨機分為2組,七氟醚麻醉下行500％供肝體積肝移植組(SEV-group)和水合氯醛麻醉下行50％供肝體積

5、肝移植組(CH—group)各30對大鼠,受體術后檢測方法:每組12只觀察7天生存率；每組6只血液動力學檢查,左頸動脈插管行動脈血壓監(jiān)測。無肝期結束前清空膀胱的尿液,再留取再灌注后2小時的尿液,作尿氟離子濃度檢測。在再灌注后2小時,24小時抽腹主動脈血,其中2ml用于檢查ALT,AST,sCr。另外3ml高速離心后保存血清,用ELISA法監(jiān)測TNFα,IL-6,NGAL。每一時間點取血動物為6只(n=6),取血后斷頭處死,立刻取腎組織。

6、用Westerblot測NF-kB蛋白表達。取腎組織蛋白裂解后測MPO活性；另制作腎組織切片,觀察腎組織的損傷情況。用連續(xù)雙抑制性離子色譜儀測血漿和尿液氟離子濃度。
　　 結果:
　　 1.50％供肝移植組再灌注50min內(nèi)的門靜脈壓力要顯著高于全肝移植組(P<0.05)。再灌注30min,2h,兩組受體的ALT,AST無明顯區(qū)別。再灌注30min全肝組的sCr明顯比50％供肝組的低(P<0.05)；再灌注30min,2

7、h,50％供肝組Cys,NGAL朋顯比全肝組高(P<0.05)。再灌注30min,50％供肝組血漿TNFα和IL-6的水平明顯增高(P<0.05)；再灌注30min,2h,50％供肝組的腎組織MPO,MDA活性明顯高于全肝組(P<0.05)。再灌注2h,50％供肝組的腎臟上皮壞死(4.2±1.2)比全肝組明顯(1.7±0.9；p<0.05)。
　　 2.無肝期10min,15min兩組的右腎小葉動脈阻力指數(shù)比基礎值明顯升高(P<

8、0.05)；再灌注5 min,10 min,15min,20min兩組的右腎小葉動脈阻力指數(shù)明顯低于基礎值(P<0.05)；再灌注5 min,10 min,15min全肝組的右腎小葉動脈阻力指數(shù)明顯高于50％供肝組(P<0.05)；再灌注20min,30min兩組之間無明顯區(qū)別(P>0.05)。再灌注30min的Cys與RI相關性不明顯(r=0.45 P=0.06)；再灌注30min的TNFα與RI密切相關(r=0.67 P=0.02)

9、。
　　 3.水合氯醛麻醉組比七氟醚麻醉組大鼠的7天存活率低(P<0.05)。再灌注2小時,兩組受體的ALT,AST無明顯區(qū)別(P>0.05)。再灌注24小時七氟醚麻醉組的sCr明顯比水合氯醛組的低(P<0.05)；再灌注2小時兩組的sCr無明顯區(qū)別(P>0.05)。再灌注2小時,七氟醚麻醉組的NGAL水平明顯比水合氯醛組低(P<0.05)。七氟醚麻醉組的血漿TNFα和IL-6的水平明顯低(P<0.05)；再灌注24小時,七氟醚

10、麻醉組的血漿TNFα明顯比水合氯醛組的低(P<0.05)。再灌注2小時七氟醚麻醉組的腎組織MPO的活性明顯低于水合氯醛組(P<0.05)。再灌注2小時,水合氯醛麻醉組的腎組織NF-k B蛋白表達比七氟醚麻醉組增加(P<0.05)。水合氯醛麻醉組的腎組織上皮壞死(3.2±0.8)比七氟醚麻醉組明顯(1.5±1.1；p<0.05)。七氟醚麻醉組再灌注2h的血漿和尿氟離子濃度增高(P<0.05)。
　　 結論:
　　 1.50

11、％供肝移植組再灌注早期門靜脈壓明顯增高,術后早期的腎功能損傷比較明顯。小體積肝移植組再灌注早期全身炎性反應和腎組織的炎癥反應較明顯。
　　 2.50％供肝移植組無肝期右腎內(nèi)動脈RI明顯增高,再灌注早期RI降低,明顯低于基礎值,50％供肝移植組的RI明顯低于全肝移植組。50％供肝移植組的RI降低可能與門靜脈壓增高,TNFα釋放增多有關。再灌注早期的RI降低并不能改善腎功能。
　　 3.七氟醚麻醉能提高大鼠小體積肝移植術后生