非神經(jīng)元型膽堿能系統(tǒng)在重癥肌無力胸腺組織中的表達(dá).pdf

1、目的：
　　重癥肌無力（Myasthenia Gravis，MG）是一種以反復(fù)活動(dòng)后橫紋肌無力為臨床表現(xiàn)的自身免疫性疾病。約80％~90%患者血清中存在乙酰膽堿受體抗體（acetylcholine receptor antibody，AchRab），AchRab與神經(jīng)肌肉突觸膜上的乙酰膽堿受體結(jié)合，主要通過競爭占領(lǐng)及補(bǔ)體參與等機(jī)制導(dǎo)致神經(jīng)沖動(dòng)不能下傳進(jìn)而導(dǎo)致肌無力癥狀。MG患者大約70%存在異常胸腺病理改變，胸腺瘤（分為A型、B型

2、、AB型）占其的10~15%，胸腺增生占其中的50~60%。張清勇教授的研究已發(fā)現(xiàn)胸腺瘤和胸腺增生組織乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶表達(dá)增高，胸腺增生組織乙酰膽堿受體表達(dá)高于胸腺瘤胸腺組織，胸腺萎縮組織乙酰膽堿受體表達(dá)低于正常胸腺組織[1]。研究發(fā)現(xiàn)機(jī)體免疫細(xì)胞以及上皮細(xì)胞上都存在非神經(jīng)元型膽堿能系統(tǒng)，其主要由乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（choline acetyl transferase，CHAT）、乙酰膽堿酯酶（acetylcholin esterase，Ac

3、hE）、nAchR（α1-α10、β1-β4、γ）、mAchR（m1-m5）、乙酰膽堿等組成[2]。國外研究者發(fā)現(xiàn)刺激nAchR和mAchR可以產(chǎn)生很多生物學(xué)以及功能的改變[3]。我們希望通過研究 MG患者胸腺組織非神經(jīng)元型膽堿能系統(tǒng)的改變，探討其對乙酰膽堿受體抗體產(chǎn)生的影響。
　　方法：
　　30例中重癥肌無力患者胸腺組織，所有患者均經(jīng)過臨床確診并進(jìn)行胸腺切除+前縱膈脂肪組織清除術(shù)，其中男性18例，女性12例，年齡18~4

4、2歲；對照組為非自身免疫性先天性心臟病患者行開胸手術(shù)者的20例胸腺組織，年齡2~12歲。采集標(biāo)本時(shí)取得患者和家屬的同意，所有患者均簽署知情同意書。免疫組化標(biāo)本收集鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科2013-2015年度130例胸腺組織石蠟切塊。
　　1. mAchR（m1、m2、m3、m4、m5）、nAchR（α1,α2,α3,α4,α5,α6,α7,α9,α10,β1,β2,β3,β4）、CHAT及AchE的mRNA的檢測：提取MG患者

5、組及正常對照組胸腺組織的總RNA，通過熒光定量PCR檢測m1、m2、m3、m4、m5、α1,α2,α3,α4,α5,α6,α7,α9,α10,β1,β2,β3,β4，CHAT及AchE的mRNA表達(dá)水平，采用2-△△Ct法在MG患者組和正常對照組之間進(jìn)行相對定量的比較；
　　2.α1、α2、α9、m3以及β2分子在胸腺組織的分布與表達(dá)：制作胸腺組織石蠟切片，通過免疫組織化學(xué)了解α1、α2、α9、m3以及β2在胸腺組織的分布與表達(dá)；

6、
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS21..0軟件。用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（-X±S）分析數(shù)據(jù)，兩組均數(shù)的比較用t檢驗(yàn)，當(dāng)p<0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.在胸腺組織中有m1、m2、m3、m4、m5、α1,α2,α3,α4,α5,α6,α7,α9,α10,β1,β2,β3,β4，CHAT及AchE mRNA的表達(dá)：MG患者胸腺組織中的α1、α9、m3的mRNA的表達(dá)水平顯著增高，與對照組相比差異有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；其中α2、β2的mRNA表達(dá)水平顯著降低，與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而MG患者胸腺組織中α3,α5,α6,α7,α10,β1,β3,β4,γ，CHAT、m1，m2，m4，m5的mRNA表達(dá)水平與對照組相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　2.α1、α2、α9、m3以及β2分子在胸腺細(xì)胞的分布與表達(dá)：：α1、α2、α9、m3、β2的陽性表達(dá)呈現(xiàn)出棕黃色顆粒，主要在胞質(zhì)及胞膜表達(dá)，

8、偶爾也可在細(xì)胞核中表達(dá)。見圖3.4。MG患者胸腺組織α1表達(dá)陽性，并且顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）;MG患者胸腺組織α2表達(dá)陽性，β2表達(dá)弱陽性，顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）;α9、m3在MG胸腺組織與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　結(jié)論：
　　MG患者胸腺組織中α1的表達(dá)水平與對照組相比顯著增高，α2、β2的mRNA表達(dá)水平與對照組相比顯著降低。α1、α2及β2在重