藏藥“佐太”中重金屬汞的蓄積性及長期使用致潛在腎損傷的機制研究.pdf

1、目的
　　本研究以藏藥“佐太”為研究對象，對其長期用藥后藥物中重金屬汞在血液和腎臟中的蓄積行為及其對腎臟的潛在腎毒性作用進行初步研究，以期揭示藏藥“佐太”可能存在的潛在腎毒性及其作用機制，為藏藥“佐太”的安全性機制研究提供前期基礎(chǔ)，為臨床安全合理有效地使用“佐太”提供一定的理論依據(jù)。
　　方法
　?。?）通過最大給藥量法分別進行KM小鼠和SD大鼠的急性毒性試驗，初步探討藏藥“佐太”的安全性；
　　（2）采用電感耦

2、合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS），分別檢測給藥后90天、135天、180天及停藥30天和120天后大鼠血液及腎臟中汞（Hg）的含量，考察Hg在動物血液中的動態(tài)變化規(guī)律及其在腎臟中的蓄積行為；
　?。?）通過酶聯(lián)免疫分析法（ELISA），分別測定給藥后90天、135天、180天及停藥后30天大鼠血液中血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN），尿液中腎損傷因子-1（Kim-1）、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）、視黃醇蛋白（RBP

3、）、β2-微球蛋白（β2-MG），及腎組織中腎損傷因子-1（Kim-1）、金屬硫蛋白（MT）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量或活性，此外，對停藥120天后大鼠腎組織中GSH含量進行再次檢測，探討藏藥“佐太”長期用藥過程中蓄積在動物體內(nèi)的Hg對動物血液、尿液及腎臟中與腎損傷相關(guān)的蛋白或酶水平的影響；
　　（4）采用實時熒光定量法（QRT-PCR），考察給藥后18

4、0天、停藥30天后，“佐太”對大鼠腎臟中Kim-1、金屬硫蛋白-1（MT-1）、金屬硫蛋白-2（MT-2）、谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（GST-pi）及停藥120天后大鼠腎臟中GST-pi的mRNA相對表達量的影響；
　?。?）通過HE染色法、免疫組化法、流式細胞儀（Flow Cytometer，F(xiàn)CM）等方法對給藥90天、135天、180天后及停藥30后天大鼠腎臟系數(shù)、腎組織病理、腎Ki67蛋白表達，腎細胞周期及凋亡率進行檢測，考察藏藥

5、“佐太”對腎組織細胞形態(tài)學、細胞增殖活性、細胞周期及凋亡率的影響。
　　結(jié)果
　　（1）藏藥“佐太”最大濃度、最大容積分別給KM小鼠和SD大鼠1日內(nèi)一次性給藥3g/kg(相當于成人臨床每日推薦劑量0.667mg/kg的4498倍)，連續(xù)觀察14天，動物外觀體征、一般活動正常，飼料消耗量正常，體質(zhì)量逐步增長，無明顯急性毒性反應(yīng)，初步表明本品屬無明顯急性毒性藥物；
　?。?）藏藥“佐太”連續(xù)給藥180天后，隨著給藥時間的延

6、長，血汞和腎汞含量均會隨之增加，并存在劑量依賴性；大鼠血中的汞較腎臟中的汞代謝快，停藥后能基本恢復(fù)，而腎臟中的汞雖然呈大幅度下降，但仍有較大的殘留蓄積，初步證實“佐太”中汞的主要靶器官是腎臟；
　?。?）藏藥“佐太”在連續(xù)給藥180天及停藥30天后，對各組大鼠血清中Scr和BUN，尿液中Kim-1、NAG、RBP、β2-MG，腎組織MDA、SOD沒有明顯影響，但在給藥90天和180天分別造成腎臟中Kim-1、MT、GSH-Px和G

7、SH水平的變化，停藥30天后，除GSH活性仍偏高外，其余指標均可逆性恢復(fù)，繼續(xù)停藥至停藥120天后，GSH活性也恢復(fù)到正常水平。
　　（4）藏藥“佐太”連續(xù)給藥180天后，各給藥組MT-1 mRNA相對表達量均顯著增加，中、低劑量組Kim-1、GST-Pi mRNA相對表達量明顯升高，而中、低劑量組MT-2 mRNA相對表達量表現(xiàn)為減少。停藥30天后，Kim-1、MT-1、MT-2 mRNA相對表達量已恢復(fù)至與空白對照組比較無明顯

8、差異，而GST-Pi mRNA相對表達量仍然偏高，推測這是機體的解毒系統(tǒng)對外源性物質(zhì)刺激所產(chǎn)生的一種應(yīng)激解毒表現(xiàn)，繼續(xù)停藥至120天后，GST-Pi mRNA相對表達量基本恢復(fù)，其中低劑量組較給藥期間的值出現(xiàn)了明顯回調(diào)，這可能與機體的多向調(diào)控機制有關(guān)，其具體機制有待進一步研究；
　?。?）藏藥“佐太”在連續(xù)給藥180天及停藥30天后，各組大鼠腎臟系數(shù)、腎組織病理、腎Ki67蛋白表達，腎細胞周期及凋亡率基本沒有明顯變化，初步表明“佐

9、太”對大鼠腎組織細胞形態(tài)學、細胞增殖活性、細胞周期及凋亡率的沒有明顯影響。
　　結(jié)論
　?。?）藏藥“佐太”為無明顯急性毒性的藥物；
　?。?）長期給予藏藥“佐太”，可引起大鼠血汞含量升高，并可造成汞在腎臟中大量蓄積，長期停藥仍有殘留，推測其在腎臟中為永久性的不可逆蓄積；
　?。?）“佐太”長期大量使用可能引起腎臟潛在的可逆性損傷，該作用機制可能與通過影響Kim-1、MT、GSH、GSH-Px的含量或活性及Kim