血清腺苷酸酶活性與癲癇發(fā)作的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景與現(xiàn)狀：
　　癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)較為常見且容易反復(fù)發(fā)作的疾病，癲癇致殘率高、病程長(zhǎng)，全世界癲癇患者數(shù)以千萬(wàn)，中國(guó)作為人口大國(guó)，癲癇患者有900多萬(wàn)，癲癇反復(fù)發(fā)作給患者及家庭造成極大的心理負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。癲癇是以腦神經(jīng)元過(guò)度放電所致的暫時(shí)性中樞神經(jīng)功能紊亂為基本特征的腦組織慢性疾病，發(fā)作性、短暫性、重復(fù)性以及刻板性是其臨床四大特點(diǎn)。近期，許多學(xué)者對(duì)癲癇病因、發(fā)病機(jī)制及病理學(xué)改變和治療方法進(jìn)行了研究并取得了較大進(jìn)展。目前普遍認(rèn)為，

2、癲癇發(fā)生與突觸重塑、神經(jīng)遞質(zhì)受體、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、離子通道、遺傳因素、苔蘚纖維發(fā)芽等多方面密切相關(guān)，癇性放電的開始伴有離子異?？缒み\(yùn)動(dòng)，通過(guò)突觸聯(lián)系和易化使放電逐漸傳播，最終通過(guò)主動(dòng)抑制和負(fù)反饋來(lái)終止癇性放電。但癲癇發(fā)作的的具體機(jī)制尚未明了，每次癲癇發(fā)作開始和終止的具體機(jī)制也未闡明。許多難治性癲癇患者應(yīng)用多種抗癲癇藥物并無(wú)顯著效果，說(shuō)明仍然需要尋找新的藥理學(xué)作用靶點(diǎn)。因此，研究癲癇的發(fā)病機(jī)制、研究新的藥理學(xué)作用靶點(diǎn)，對(duì)改善癲癇患者的預(yù)后及

3、降低死亡率有重要的臨床意義。
　　許多相關(guān)研究表明，腺苷系統(tǒng)是腦組織中重要的抗癲癇和腦保護(hù)系統(tǒng)。其通過(guò)腺苷與G蛋白偶聯(lián)腺苷受體相互作用來(lái)抑制腦組織內(nèi)的神經(jīng)元活性，急性癲癇發(fā)作后腺苷水平顯著升高，隨后發(fā)作終止，腺苷系統(tǒng)被稱為“內(nèi)源性抗癲癇系統(tǒng)”，可溶性核苷酸酶可與胞外核苷酸酶協(xié)同作用產(chǎn)生腺苷而在癇性發(fā)作中起著重要的調(diào)節(jié)作用。目前腺苷酸酶活性與癲癇的關(guān)系已引起廣大醫(yī)學(xué)工作者的重視。
　　目前，癲癇發(fā)作后，患者血清ATP、ADP及

4、AMP水解率改變以及血清可溶性磷酸二酯酶活性變化的相關(guān)報(bào)道較少；不同癲癇發(fā)作類型的血清ATP、ADP及 AMP水解率改變以及血清可溶性磷酸二酯酶活性變化的是否相同未見有報(bào)道；腺苷A1R與模型海馬神經(jīng)元損傷的關(guān)系方面的研究也較少。本文主要采用前瞻性研究納入癲癇患者65例（全面性發(fā)作33例，部分性發(fā)作32例）和正常健康對(duì)照者35例，從第一部分和第二部分兩個(gè)部分分別探討了不同癲癇發(fā)作類型發(fā)作前后不同時(shí)間點(diǎn)血清ATP、ADP及AMP水解情況，不

5、同癲癇發(fā)作類型發(fā)作前后不同時(shí)間點(diǎn)血清可溶性磷酸二酯酶活性變化情況，以了解腺苷酸酶活性與癲癇發(fā)作的關(guān)系以及不同癲癇發(fā)作類型腺苷酸酶活性有無(wú)差異，進(jìn)一步探討腺苷酸酶活性在癲癇發(fā)作過(guò)程中的作用機(jī)制，并深入了解不同癲癇發(fā)作類型對(duì)腺苷酸酶活性的敏感性，為臨床選藥提供依據(jù)；第三部分通過(guò)建立杏仁核點(diǎn)燃癲癇大鼠模型，從而對(duì)點(diǎn)燃癲癇大鼠各個(gè)時(shí)間段海馬神經(jīng)元的病理組織學(xué)和凋亡的影響進(jìn)行分析，探討腺苷A1R與模型海馬神經(jīng)元損傷的關(guān)系，了解其對(duì)腦神經(jīng)的保護(hù)作用

6、，從而能更深刻的理解腺苷A1R與癲癇間的關(guān)系，為癲癇的治療提供參考。
　　第一部分不同癲癇發(fā)作類型發(fā)作間期和癲癇發(fā)作后血清ATP、ADP和AMP水解率的動(dòng)態(tài)變化
　　目的：
　　探討患者發(fā)作間期和發(fā)作后血清ATP、ADP和AMP水解率的變化，分析ATP、ADP和AMP水解率與癲癇發(fā)作的關(guān)系，并分析不同癲癇發(fā)作類型癲癇發(fā)作后ATP、ADP和AMP水解率有無(wú)差異。
　　方法：
　　1．研究對(duì)象：收集2014年3

7、月至2015年12月在我院神經(jīng)內(nèi)科治療的癲癇患者65例，納入病例組（全面性發(fā)作組33例，復(fù)雜部分性發(fā)作組32例）。病例組另外收集同期在我院門診進(jìn)行常規(guī)體檢的正常人員35例作為健康對(duì)照組。
　　2．觀測(cè)指標(biāo)：采用紫外線吸收分光光度法，觀察病例組癲癇發(fā)作后5、10、20、30、60 min和10 h時(shí)的ATP、ADP和AMP水解率變化情況，與健康對(duì)照組比較；觀察全面性發(fā)作組和復(fù)雜部分性發(fā)作組癲癇發(fā)作后5、10、20、30、60 min

8、和10 h時(shí)的ATP、ADP和AMP水解率變化情況，并進(jìn)行比較。
　　3．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS21.0版本統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，ATP或ADP或AMP水解率以（x±s)描述，采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　1．病例組患者在發(fā)作間期ATP水解率、ADP水解率、AMP水解率與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；
　　2．發(fā)作后5min時(shí)ATP水解率、ADP水解率、AMP水解

9、率均明顯升高，其中ATP水解率在發(fā)作后20 min達(dá)峰值，之后逐漸下降，至發(fā)作后10 h恢復(fù)至發(fā)作間期水平；ADP水解率、AMP水解率在發(fā)作后5 min達(dá)峰值，隨后逐漸下降，至發(fā)作后60 min即恢復(fù)至發(fā)作間期水平(P<0.05)。
　　3．病例組發(fā)作后5min時(shí)患者血清ATP水解率、ADP水解率、AMP水解率均明顯升高，病例組患者ATP水解率與對(duì)照組相比在發(fā)作后20 min達(dá)峰值，之后逐漸下降，至發(fā)作后10 h恢復(fù)至發(fā)作間期水平

10、；ADP水解率、AMP水解率在發(fā)作后5 min達(dá)峰值，隨后逐漸下降，至發(fā)作后60 min即恢復(fù)至發(fā)作間期水平(P<0.05)。
　　4．全面性發(fā)作組和部分性發(fā)作組相比，癲癇發(fā)作后5min，20 min血清ATP水解率、ADP水解率、AMP水解率升高更為顯著(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　癲癇發(fā)作后腺苷酸水解率明顯升高，全面性發(fā)作患者與部分性發(fā)作患者相比，腺苷酸水解率升高的更為明顯，提示腺苷酸酶活性增高可能參與了與癲

11、癇發(fā)作終止相關(guān)的調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　第二部分不同癲癇發(fā)作類型血清可溶性磷酸二酯酶活性與癲癇發(fā)作的關(guān)系
　　目的：
　　探討不同癲癇類型患者發(fā)作后血清可溶性磷酸二酯酶活性的變化情況，了解可溶性磷酸二酯酶活性在癲癇發(fā)作中的作用。
　　方法：
　　1．研究對(duì)象：收集2014年3月至2015年12月在我院神經(jīng)內(nèi)科治療的癲癇患者65例，納入病例組（全面性發(fā)作組33例，復(fù)雜部分性發(fā)作組32例）。同時(shí)收集常規(guī)體檢的正常人員3

12、5例作為健康對(duì)照組。
　　2．觀測(cè)指標(biāo)：采用紫外線吸收分光光度法，觀察病例組患者發(fā)作后5min、10 min、20min和10 h時(shí)磷酸二酯酶水平、乳酸脫氫酶(LDH)水平變化情況并與正常對(duì)照組比較。觀察全面性發(fā)作組和復(fù)雜部分性發(fā)作組癲癇發(fā)作后5min、10 min、20min和10 h時(shí)磷酸二酯酶水平、乳酸脫氫酶(LDH)水平變化，并進(jìn)行比較。
　　3．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS21.0版本統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，磷酸二酯酶

13、活性、LDH以（x±s)描述，采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1．病例組患者在發(fā)作間期磷酸二酯酶活性與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　2．病例組患者在發(fā)作后5min、10 min、20min時(shí)磷酸二酯酶活性明顯升高，在發(fā)作后20 min時(shí)達(dá)峰值，之后逐漸下降，至發(fā)作后10 h恢復(fù)至發(fā)作間期水平(P<0.05)；
　　3．全面性發(fā)作患

14、者和部分性發(fā)作患者相比，發(fā)作后5min、10 min、20min時(shí)磷酸二酯酶活性明顯升高，在發(fā)作后20 min時(shí)達(dá)峰值，之后逐漸下降，至發(fā)作后10 h恢復(fù)至發(fā)作間期水平(P<0.05)；
　　4．LDH活性在發(fā)作間期、發(fā)作后不同時(shí)間點(diǎn)的變化均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　癲癇發(fā)作后磷酸二酯酶活性明顯升高，全面性發(fā)作后磷酸二酯酶活性升高更為明顯，磷酸二酯酶活性增高與ATP水解率密切相關(guān)，也進(jìn)一步證明了癲

15、癇發(fā)作后腺苷酸活性明顯升高，這可能是癲癇發(fā)作終止的一個(gè)調(diào)節(jié)機(jī)制；全面性發(fā)作后磷酸二酯酶活性增高升高更為明顯，證實(shí)腺苷酸活性對(duì)全面性發(fā)作的調(diào)節(jié)作用更強(qiáng)。
　　第三部分腺苷A1受體對(duì)杏仁核點(diǎn)燃癲癇大鼠海馬神經(jīng)元損傷作用機(jī)制
　　目的：
　　探討腺苷A1受體活性對(duì)點(diǎn)燃癲癇大鼠海馬神經(jīng)元損傷的作用，為癲癇發(fā)作的治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1．研究對(duì)象：選擇84只SPF級(jí)雄性Wistar大鼠，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法

16、將動(dòng)物分為正常組、致癇組、致癇+腺苷A1R拮抗劑(8-環(huán)戊-1，3-二丙基黃嘌呤，DPCPX)組、致癇+腺苷A1R激動(dòng)劑(2-氯化腺苷，2-CADO)4個(gè)分組，每組21只。致癇組、致癇+ DPCPX組、致癇+2-CADO組采用電刺激點(diǎn)燃癲癇模型。正常組未進(jìn)行手術(shù)和電刺激致癇等處理；致癇組癲癇模型建立成功前后未注射任何藥物；致癇+DPCPX組大鼠癲癇模型建立成功前1h和成功后1 h尾部靜脈注射0.3mg/kg DPCPX；致癇+2-CAD

17、O組大鼠癲癇模型成功前1h和成功后1 h尾部靜脈注射0.6mg/kg2-CADO。
　　2．觀測(cè)指標(biāo)：采用TUNEL法，觀察各組在癲癇模型建立成功后1天、15天、30天時(shí)的海馬CA3區(qū)組織學(xué)病理變化及神經(jīng)元凋亡指數(shù)(AI)變化情況。
　　3．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：符合正態(tài)分布數(shù)據(jù)用(x±s)描述，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有顯著性，統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件選用SPSS21.0版本。
　　結(jié)果：
　　1．致癇組、致癇+DPCPX組、

18、致癇+2-CADO組動(dòng)物在點(diǎn)燃癲癇后1天、15天、30天均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)元細(xì)胞排列松散無(wú)規(guī)則，輪廓模糊，邊緣欠清晰，胞核萎縮，胞漿空泡等神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損害；
　　2．相同時(shí)間點(diǎn)，致癇+DPCPX組的神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損害程度較致癇組加重，致癇+2-CADO組較致癇組減輕。正常組在不同時(shí)間點(diǎn)的AI變化不明顯(P＞0.05)，致癇組、致癇+DPCPX組、致癇+2-CADO組的AI隨著癲癇發(fā)作時(shí)間的延長(zhǎng)，AI逐漸增加(P<0.05)；
　

19、　3．在相同時(shí)間點(diǎn)，致癇組、致癇+DPCPX組、致癇+2-CADO組的AI均明顯高于正常組(P<0.05)，致癇+DPCPX組的AI均明顯高于致癇組(P<0.05)；致癇+2-CADO組的AI明顯低于致癇組和致癇+DPCPX組(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　癲癇發(fā)作會(huì)引起神經(jīng)元損傷和凋亡，腺苷 A1R活性降低，神經(jīng)元損傷和凋亡更為明顯，這可能是癲癇發(fā)作后神經(jīng)元損傷的機(jī)制之一；通過(guò)增加腺苷 A1R活性可保護(hù)神經(jīng)元，降低其損