線粒體DNA G6179A多態(tài)性與2型糖尿病及其并發(fā)癥的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　通過(guò)PCR-測(cè)序方法，探討浙江地區(qū)漢族人線粒體DNA(mitochondrial DNA，mtDNA) COⅠ（細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅰ）基因G6179A多態(tài)性與2型糖尿病(type2 diabetes mellitus，T2DM)及其并發(fā)癥的相關(guān)性。
　　方法:
　　1.根據(jù)1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，收集2009年2月至2013年2月在溫州醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科住院并確診為T2DM的散發(fā)病人50

2、5例（61.02±12.16），同時(shí)收集526例年齡相匹配的無(wú)糖尿病及家族史，無(wú)高血壓、高血脂、腎病、心腦血管疾病以及口服葡萄糖耐量正常的健康體檢者為正常對(duì)照（51.38±16.52）。采集兩組樣本的外周血，用EDTA-K2抗凝，并詳細(xì)記錄兩組所有受試者的基本臨床資料及有關(guān)的各項(xiàng)檢查結(jié)果。
　　2.提取受試樣本的外周血總DNA，通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增線粒體DNA COⅠ基因區(qū)并進(jìn)行一代測(cè)序。測(cè)序結(jié)果與劍橋參考序列(revi

3、sedCambridge Reference Sequence，rCRS)進(jìn)行比對(duì)。
　　3.根據(jù)線粒體DNA6179位點(diǎn)的多態(tài)性變化，我們對(duì)疾病組和健康對(duì)照組進(jìn)行分子分型，隨后通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析G6179A多態(tài)性在糖尿病組與健康對(duì)照組的分布差異。
　　4.分析G6179A多態(tài)性與T2DM中各項(xiàng)臨床資料、主要生化指標(biāo)以及各種并發(fā)癥（高血壓、視網(wǎng)膜病變、腎病、大血管病變、周圍神經(jīng)病變、糖尿病足）及合并癥的關(guān)系。
　　5.

4、對(duì)T2DM按家族史、胰島素治療情況進(jìn)行分組，分析探討G6179A多態(tài)性與T2DM家族史、胰島素治療的關(guān)系。
　　6.按性別比較T2DM患者在6179A和6179G兩組間的各項(xiàng)臨床資料和主要生化檢查結(jié)果以及各種并發(fā)癥之間的差異。
　　7.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料各參數(shù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，計(jì)量資料采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)及Fisher精確概率法。
　　結(jié)果:

5、>　　1.將糖尿病組與健康對(duì)照組各基本資料進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)糖尿病組在BMI(P＜0.001)、收縮壓(P＜0.001)、舒張壓(P＜0.001)、空腹血糖(P＜0.001)、血脂四項(xiàng)間均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。在T2DM患者中，男性患者253例，女性患者252例，發(fā)生G6179A變異的總變異率為4.95％(25/505)，在正常對(duì)照組中，發(fā)生G6179A變異的總變異率為3.04％(16/526)。將兩組結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，G617

6、9A多態(tài)性在兩組間分布無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。但按性別分析G6179A多態(tài)性在兩組間分布差異，發(fā)現(xiàn)男性6179A的比例在T2DM組（占6.72％）要明顯高于正常男性對(duì)照組（占2.69％），兩組間分布有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（OR=2.601;95％CI,1.061-6.390;P=0.032）。而女性6179A的比例在兩組間分布無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　2.將T2DM患者分為6179A和6179G兩組，分析發(fā)現(xiàn)兩組

7、間BMI有顯著差異(P＜0.05)，6179A組患者平均BMI要明顯低于6179G組。G6179A多態(tài)性變異降低了T2DM患者的BMI指數(shù)，該指數(shù)的減低符合線粒體糖尿病的特征。兩組間其余各項(xiàng)臨床資料和主要生化檢查結(jié)果均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。在糖尿病并發(fā)癥的比較分析中，大血管病變并發(fā)癥在6179A組中的發(fā)生率顯著低于6179G組，兩組間有顯著差異(OR=0.338;95％CI,0.133-0.860;P=0.017)。
　　

8、3.發(fā)生G6179A多態(tài)性改變的T2DM患者中，有糖尿病家族史的病人平均年齡要顯著低于無(wú)家族史的病人(P＜0.05)。
　　4.在男性T2DM患者中:攜帶6179A多態(tài)性患者的發(fā)病年齡(P＜0.05)、BMI(P＜0.05)、高血壓發(fā)生率(P＜0.05)、大血管病變發(fā)生率(P＜0.05)均顯著低于6179G攜帶者。而女性T2DM患者在6179A和6179G兩組間各項(xiàng)資料分布無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:

9、>　　1.本研究發(fā)現(xiàn)6179A多態(tài)性是男性二型糖尿病發(fā)生的高風(fēng)險(xiǎn)因素;女性T2DM的發(fā)生與6197A無(wú)顯著性差異。
　　2.盡管6179A多態(tài)性是男性二型糖尿病發(fā)生的高風(fēng)險(xiǎn)因素，但本研究仍發(fā)現(xiàn)該變異是二型糖尿病大血管病變并發(fā)癥的保護(hù)性因素。此外，該變異可能對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變、糖尿病足、糖尿病腎病及高血壓也有一定的保護(hù)效應(yīng)。這一結(jié)果也體現(xiàn)了線粒體DNA致病機(jī)制的復(fù)雜性。
　　3.G6179A多態(tài)性與家族史的分析表明:有家族遺