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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
毛囊生長(zhǎng)是一個(gè)復(fù)雜的周期性過(guò)程,包括毛發(fā)生長(zhǎng)期、退行期、休止期。雖然調(diào)控毛發(fā)周期的機(jī)制還未完全闡明,目前已明確:毛乳頭與鄰近毛囊上皮、毛母質(zhì)、外毛根鞘之間的相互作用調(diào)控著每個(gè)周期的延續(xù)和過(guò)渡。間質(zhì)來(lái)源的毛乳頭位于毛囊的底部,外周由毛母質(zhì)包繞,它在體內(nèi)和體外具有誘導(dǎo)毛囊生長(zhǎng)的特性。來(lái)源于毛乳頭細(xì)胞的信號(hào)可以直接影響鄰近毛母質(zhì)細(xì)胞和外毛根鞘細(xì)胞的生長(zhǎng),并且可以調(diào)控毛囊生長(zhǎng)周期。這些信號(hào)包括sonic hedgehog(Sh
2、h)途徑、胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-1)、wnt/β-catenin途徑、骨形成蛋白(BMP)、成纖維細(xì)胞因子(FGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)等。
雄激素性脫發(fā)(AGA)是最常見(jiàn)的男性脫發(fā)疾病,發(fā)病機(jī)制涉及局部雄激素分泌增多、雄激素受體(AR)表達(dá)量增多、Ⅱ型5α還原酶和旁分泌等,而雙氫睪酮(DHT)目前被認(rèn)為是雄激素性脫發(fā)主要致病因素。睪酮在Ⅱ型5α還原酶的作用下可形成活性更強(qiáng)的DHT,Ⅱ
3、型5α還原酶的致病作用已經(jīng)非常明確,男性雄激素性脫發(fā)的首選治療方案是長(zhǎng)期口服Ⅱ型5α還原酶抑制劑,它可降低患者血清和頭皮的DHT濃度,目前DHT誘導(dǎo)的雄激素性脫發(fā)的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。
既往研究發(fā)現(xiàn)DHT促進(jìn)AGA患者頂部毛乳頭細(xì)胞分泌TGF-β,從而抑制毛囊上皮細(xì)胞的生長(zhǎng),DHT同時(shí)也可以促進(jìn)胡須部毛乳頭細(xì)胞分泌IGF-1,從而促進(jìn)毛囊上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步研究DHT誘導(dǎo)的旁分泌途徑,初步探索FGF2及FGF7是否
4、參與男性雄激素性脫發(fā)的發(fā)病。
方法和結(jié)果:
1、從人頭皮中分離出毛乳頭,體外培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞,檢測(cè)各代毛乳頭細(xì)胞中AR的表達(dá)。
結(jié)果:體外傳代培養(yǎng)時(shí),第6代毛乳頭細(xì)胞AR蛋白表達(dá)量明顯低于第3代毛乳頭細(xì)胞。
2、構(gòu)建AR腺病毒載體并轉(zhuǎn)染毛乳頭細(xì)胞,RT-PCR、Western blot、免疫熒光檢測(cè)AR的表達(dá),CCK-8法檢測(cè)AR腺病毒對(duì)人毛乳頭細(xì)胞增殖的影響。
結(jié)果:對(duì)照組(未轉(zhuǎn)染腺病毒
5、的毛乳頭細(xì)胞)、空載體組、AR過(guò)表達(dá)組各組之間毛乳頭細(xì)胞的增殖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
3、以下步驟均在過(guò)表達(dá)AR的毛乳頭細(xì)胞中進(jìn)行,根據(jù)實(shí)驗(yàn)是否加入DHT、0.01%乙醇進(jìn)行分組,脫發(fā)區(qū)頂部毛乳頭細(xì)胞組包括:0M(0mol/L)-DHT組、0.01%乙醇組、10nM(10nmol/L)-DHT組;枕部毛乳頭細(xì)胞組包括:0M-DHT組、0.01%乙醇組、10nM-DHT組。RT-PCR、Western blot、ELISA檢測(cè)FGF7及
6、FGF2的表達(dá)。
結(jié)果:頂部毛乳頭細(xì)胞中,0.01%乙醇組FGF7mRNA表達(dá)水平高于10nM-DHT組[(1.58±0.15) vs(0.83±0.18) P=0.018],0M-DHT組FGF2mRNA表達(dá)量高于10nM-DHT組[(0.90±0.19) vs(0.41±0.11)P=0.22]。枕部毛乳頭細(xì)胞中,F(xiàn)GF7及FGF2mRNA表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞內(nèi)FGF7及FGF2的蛋白檢測(cè):脫發(fā)區(qū)毛乳頭細(xì)胞中,0M
7、-DHT組FGF7蛋白表達(dá)水平高于10nM-DHT組[(0.393±0.060) vs(0.282±0.019) P=0.038],10nM-DHT組FGF2蛋白表達(dá)水平高于0.01%乙醇組[(0.294±0.019) vs(0.201±0.058) P=0.021]。枕部毛乳頭細(xì)胞中,10nM-DHT組FGF7蛋白表達(dá)水平高于0M-DHT組[(0.207土0.025) vs(0.108±0.038)P=0.038],F(xiàn)GF2蛋白表達(dá)差
8、異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分泌型FGF7及FGF2蛋白檢測(cè):頂部毛乳頭細(xì)胞中,與0nM-DHT組相比,當(dāng)使用含10nM-DHT的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)頂部毛乳頭細(xì)胞時(shí),F(xiàn)GF7外分泌量從216.446pg/mL上升至249.942pg/mL,F(xiàn)GF2外分泌量從123.125pg/mL下降至51.667 pg/mL,而與0.01%乙醇組相比,當(dāng)加入10nM-DHT時(shí),F(xiàn)GF2外分泌量從12.381pg/mL上升至51.667 pg/mL。
結(jié)論:
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