RGD肽型陽離子類脂的合成及基因轉運性能研究.pdf

1、基因治療作為一種新興的癌癥治療方法已用于臨床研究與治療，安全高效的載體是成功的關鍵。陽離子脂質體的毒性較低，具有很好的生物相容性，并且易于制備，目前已經(jīng)越來越受到科研人員的關注，應用前景十分廣闊。
　　本文使用固相合成法合成了精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽，并與中間體A14連接得到了RGD肽型陽離子類脂，經(jīng)分離提純，得到HPLC純度95％以上的產(chǎn)物。經(jīng)過ESI-MS、IR和1H NMR等手段的表征，證實產(chǎn)物結構正確。

2、>　　通過薄層分散法將所合成的RGD肽型陽離子類脂制備成陽離子脂質體，并使用透射電鏡和激光粒度分析儀對其進行分析，證實所制備的脂質體形態(tài)呈現(xiàn)球形，平均尺寸為50nm左右，表面帶正電，電位在80 mV左右。
　　用凝膠電泳延滯實驗考查了RGD型陽離子脂質體結合DNA的能力，實驗結果證明，陽離子脂質體能夠與DNA形成復合物。當脂質體與DNA比例增大時，其與DNA的結合能力有所增強，助類脂(DOPE)的加入可提高脂質體結合DNA的能力。

3、
　　將所制備的RGD肽型陽離子脂質體運載質粒DNA轉染(pGFP-N2a)宮頸癌細胞(Hela)細胞。結果表明，當脂質體與DNA的質量比約為3/1時，脂質體與DOPE的摩爾比為1/1時，陽離子脂質體達到了最高轉染效率，其轉染效果與商品化的轉染試劑DOTAP和Lipofectamine2000相當。
　　使用MTT比色法評價了RGD肽型陽離子脂質體的細胞毒性。結果表明，以RGD肽為頭部的陽離子脂質體作為運載基因的載體對Hel