匹羅卡品致大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬Puma和CytC的表達(dá)變化.pdf

1、目的：癲癇是一種常見(jiàn)病，流行病學(xué)調(diào)查顯示其發(fā)病率為5‰~7‰。癲癇發(fā)作不僅可引起腦部神經(jīng)元的壞死或病理性凋亡及神經(jīng)生物學(xué)改變，而且還常引起患者及家屬嚴(yán)重的心理障礙。癲癇持續(xù)狀態(tài)（Status epilepticus，SE）是神經(jīng)科臨床常見(jiàn)的危急重癥，常常導(dǎo)致大腦易損區(qū)海馬組織的損傷，若得不到及時(shí)的緩解和治療，死亡率很高。研究發(fā)現(xiàn)Bcl-2蛋白家族中僅具有BH3結(jié)構(gòu)域的P53上調(diào)細(xì)胞凋亡調(diào)控因子Puma（P53 up-regulated

2、modulator of apoptosis，Puma）蛋白在細(xì)胞凋亡途徑中發(fā)揮了重要的作用。而CytC在線粒體外膜滲透性增加的情況下可以釋放出來(lái)，參與內(nèi)源性線粒體凋亡途徑。Puma和CytC對(duì)SE后海馬神經(jīng)元的損傷機(jī)制研究較少，本實(shí)驗(yàn)采用匹羅卡品制作SE大鼠動(dòng)物模型，探討 SE后24小時(shí)CytC和Puma在海馬組織中的表達(dá)情況。
　　方法：成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠62只，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組（n=54）和對(duì)照組

3、（n=8）。實(shí)驗(yàn)組先應(yīng)用硫酸阿托品以拮抗匹羅卡品的外周膽堿能效應(yīng)，隨后通過(guò)匹羅卡品腹腔注射制造癲癇模型，根據(jù)大鼠是否發(fā)生SE將其分為癲癇持續(xù)狀態(tài)組（SE組）和非癲癇持續(xù)狀態(tài)組（非SE組）。24小時(shí)后取大鼠海馬組織，HE染色觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的數(shù)量，TUNEL染色觀察海馬神經(jīng)元的損傷情況。采用Western blot方法測(cè)定海馬組織中Puma的表達(dá)，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)海馬組織中CytC的含量。運(yùn)用Pearson相關(guān)分析法分析Puma

4、和CytC表達(dá)的相關(guān)性。對(duì)照組除匹羅卡品用生理鹽水代替外，其余所有操作步驟與實(shí)驗(yàn)組相同。
　　結(jié)果：54只實(shí)驗(yàn)組大鼠中未誘導(dǎo)出SE的有12只，歸入非SE組。成功誘導(dǎo)出SE的有42只，成功率為77.8％。42只SE大鼠中24h之內(nèi)死亡14只，死亡率為33.3%，入SE組28只。對(duì)照組和非SE組24小時(shí)內(nèi)均未死亡。SE組大鼠海馬CA1區(qū)HE染色神經(jīng)元數(shù)量（54.75±3.37）與對(duì)照組（103.75±2.12）和非SE組（100.67

5、±2.19）相比，顯著減少（p<0.05）。SE組TUNEL陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目（25.14±2.77）與對(duì)照組（3.25±2.19）和非SE組（3.33±2.02）相比明顯增加（p<0.05）。而且可見(jiàn)SE組海馬組織CytC陽(yáng)性神經(jīng)元的含量（14.11±2.38）較對(duì)照組（2.88±2.70）和非SE組（4.42±2.19）明顯增多（p<0.05）。并可見(jiàn)SE組海馬組織Puma蛋白的表達(dá)（0.439±0.038）較對(duì)照組（0.016±0.0

6、03）和非SE組（0.249±0.034）明顯增多（p<0.05）。相關(guān)性分析顯示SE組Puma蛋白的表達(dá)和Tunel染色陽(yáng)性神經(jīng)元細(xì)胞含量之間存在著相關(guān)關(guān)系（r=0.891,p<0.01）；而且，SE組Puma和CytC的含量變化具有相關(guān)性（r=0.895，P<0.01）。
　　結(jié)論：大鼠SE后24h海馬神經(jīng)元出現(xiàn)凋亡，而且Puma蛋白的表達(dá)和Tunel染色陽(yáng)性神經(jīng)元細(xì)胞含量之間存在著正相關(guān)關(guān)系。Puma和CytC在SE大鼠海馬