重組人可溶性白介素4受體噬菌體單鏈抗體庫(kù)的構(gòu)建與篩選.pdf

1、單鏈抗體(Single chain antibody，ScFv)是目前分子量最小的抗體，具有對(duì)腫瘤組織的穿透力強(qiáng)，可以與其他效應(yīng)分子連接成抗腫瘤融合蛋白等特點(diǎn)，是保持抗體親和性和特異性的最小功能性抗體片段，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)研究領(lǐng)域。
　　研究發(fā)現(xiàn)，多種腫瘤細(xì)胞表面如胰腺癌、乳腺癌和肺癌等癌細(xì)胞存在過量表達(dá)白介素4受體(IL-4R)現(xiàn)象。進(jìn)一步研究證實(shí)IL-4R有高度的腫瘤細(xì)胞表達(dá)特異性，具備作為免疫毒素作用靶點(diǎn)的要求，其配

2、體或抗體易于獲得、便于實(shí)驗(yàn)。
　　本研究利用重組人可溶性白介素4受體蛋白抗原免疫Balb/c小鼠，TRIZOL法提取總RNA，RT-PCR擴(kuò)增VH和VL基因，SOE-PCR擴(kuò)增出帶有限制性酶切位點(diǎn)的ScFv，利用限制性內(nèi)切酶SfiⅠ和NotⅠ分別對(duì)ScFv和pCANTAB5E載體進(jìn)行雙酶切，利用T4連接酶進(jìn)行兩者的連接，并轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)菌E.coli TG1中制作轉(zhuǎn)化子，在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到噬菌體單鏈抗體庫(kù)，通過3輪富集和篩選，選擇