人源甲狀腺未分化癌噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建與篩選.pdf

1、目的：構(gòu)建天然人源甲狀腺未分化癌噬菌體單鏈抗體庫，并初步篩選出抗甲狀腺未分化癌抗體。
　　方法：提取ATC病人癌周淋巴結(jié)總RNA，逆轉(zhuǎn)錄cDNA。以此cDNA為模板分別擴增 VH、VL基因片斷，并與相應 Lin ker連接；再采取重疊延伸PCR技術(shù)拼接組裝成scFv基因片段。隨后引入酶切位點sfi I和Not I，連接經(jīng)雙酶切后的scFv重組基因片段與質(zhì)粒pCANTAB-5E。產(chǎn)物經(jīng)化學轉(zhuǎn)化并轉(zhuǎn)入大腸桿菌 TG1，超感染噬菌體，構(gòu)

2、建噬菌體單鏈抗體庫。最后采用甲狀腺未分化癌細胞為抗原對建立的抗體庫進行4輪“吸附、洗脫、擴增”的篩選，并應用ELS IA方法鑒定其特異性。
　　結(jié)果：成功獲得約為750 bp的sc F v基因。用p UC19標準質(zhì)粒測定轉(zhuǎn)化效率達到108 c fu/μg，雙酶切鑒定 s cF v基因的陽性插入率為86.4％(19/22)。經(jīng)過四輪親和篩選，針對甲狀腺未分化癌細胞的單鏈抗體得到明顯富集，第四輪收獲率為第一輪的77倍。ELS IA結(jié)果