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文檔簡介
1、目的：構建卵巢癌人源單鏈抗體庫并運用核糖體展示技術對其進行篩選。
方法：從8名卵巢癌患者志愿者抽取血樣，應用淋巴細胞分離液分離外周血淋巴細胞，提取總RNA，通過聚合酶鏈式反應(PCR)技術擴增人全套重鏈可變區(qū)基因和輕鏈可變區(qū)基因，并對它們進行拼接；選取人胎盤生長因子(human placentalgrowth factor，PLGF)作為目標抗原對該單鏈抗體庫進行核糖體展示篩選研究；雙酶切技術將anti-PLGF單鏈抗體基
2、因連入表達載體(pET-30(a)+)并轉(zhuǎn)化E.coliBL21進行表達，在LB培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)12小時，經(jīng)IPTG誘導表達6小時，收獲菌體，收集細菌進行裂解，對所獲得蛋白進行SDS-PAGE電泳檢測。
結(jié)果：
1、成功構建卵巢癌人源單鏈抗體庫，庫容量為6.5×1013，經(jīng)測序分析10個陽性重組子的序列，判斷該抗體庫豐富多樣；
2、經(jīng)過3輪篩選，獲得anti-PLGF單鏈抗體基因，經(jīng)大腸桿菌克
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