人工設(shè)計(jì)駱駝源單域抗體庫構(gòu)建及雌二醇抗體篩選.pdf

1、1 分類號 密 級 UDC 保密期限 碩 士 學(xué) 位 論 文 碩 士 學(xué) 位 論 文 題 目 人 工 設(shè) 計(jì) 駱 駝 源 單 域 抗 體 庫 構(gòu) 建 及 雌 二 醇 抗 體 篩 選

2、 作者姓名 劉 超 指導(dǎo)教師 高 志 賢 研 究 員 培養(yǎng)單位

3、 衛(wèi) 生 學(xué) 環(huán) 境 醫(yī) 學(xué) 研 究 所 專業(yè)名稱 營 養(yǎng) 與 食 品 衛(wèi) 生 學(xué) 論文提交日期 20

4、16 年 5 月 10 日 學(xué)位授予單位 中 國 人 民 解 放 軍 軍 事 醫(yī) 學(xué) 科 學(xué) 院 答辯委員會主席 崔 建 升 中 國 人 民 解 放 軍 軍 事 醫(yī) 學(xué) 科 學(xué) 院 制 中 國 人 民 解 放 軍 軍 事 醫(yī) 學(xué) 科 學(xué) 院 制

5、 3 目 錄 縮略詞表 .................................................................................................................. 5 摘要 ...................................................................................

6、....................................... 7 Abstract .................................................................................................................... 11 前言 ............................................

7、............................................................................ 16 1 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 .......................................................................................... 17 2 研究目的與意義 ..........................

8、................................................................ 18 3 立題依據(jù) ...................................................................................................... 20 4 學(xué)術(shù)價(jià)值和應(yīng)用前景...........................

9、........................................................ 20 5 擬解決的科學(xué)問題 ...................................................................................... 21 6 指導(dǎo)思想 ..................................................

10、.................................................... 22 7 研究思路 ...................................................................................................... 23 8 研究方法 ..........................................

11、............................................................ 23 第一章 駱駝源單域抗體庫的構(gòu)建 ........................................................................ 25 1.1 引言..........................................................

12、................................................. 25 1.2 材料與方法 ............................................................................................... 25 1.2.1 主要試劑 ...............................................

13、............................................. 25 1.2.2 主要儀器 ............................................................................................ 26 1.2.3 質(zhì)粒與菌株 ....................................................

14、.................................... 26 1.2.4 培養(yǎng)基及相關(guān)溶液的配置 ................................................................ 26 1.2.5 方法 ...................................................................................

15、................. 27 1.2.5.1 駱駝血液 cDNA 文庫的構(gòu)建 ...................................................... 27 1.2.5.2 駱駝源 VHH 單域抗體的實(shí)體庫構(gòu)建......................................... 28 1.2.5.3 駱駝單域抗體的虛擬庫的構(gòu)建 .......................

16、............................ 31 1.3 結(jié)果與分析 ............................................................................................... 33 1.3.1 駱駝血液 cDNA 文庫的構(gòu)建 .........................................................

17、.... 33 1.3.1.1 駱駝血液樣品的采取和淋巴細(xì)胞分離 ....................................... 33 1.3.1.2 駱駝外周血淋巴細(xì)胞中總 mRNA 的提取及 cDNA 第一條鏈的合成 ................................................................................................. 3

18、3 1.3.2 駱駝源 VHH 單域抗體的實(shí)體庫構(gòu)建 ............................................... 33 1.3.2.1 駱駝單域抗體 VHH 基因片段的擴(kuò)增......................................... 33 1.3.2.2 pMD18-T-VHH 重組質(zhì)粒構(gòu)建及 DH5?-pMD18-T-VHH 單克隆菌株的獲得 ................

19、..................................................................... 34 1.3.2.3 DH5?-pMD18-T-VHH 單克隆菌株的測序及測序結(jié)果分析 ...... 35 1.3.3 駱駝源 VHH 單域抗體的虛擬庫構(gòu)建 ............................................... 37 1.3.3.1 VHH 抗體三維結(jié)構(gòu)的初

20、步獲取 ................................................. 37 1.3.3.2 VHH 抗體三維結(jié)構(gòu)的優(yōu)化 ......................................................... 40 1.4 討論.........................................................................

21、.................................. 43 1.4.1 駱駝源單域抗體基因庫的構(gòu)建.......................................................... 43 1.4.2 駱駝源單域抗體虛擬庫的構(gòu)建.......................................................... 44 第二章 雌二醇駱駝源單域抗體的虛擬篩選.

22、........................................................ 46 2.1 引言........................................................................................................... 46 2.2 材料與方法 ................................