噬菌體抗體庫(kù)的構(gòu)建及篩選大腸癌相關(guān)抗原抗體的研究.pdf

1、目的:該課題采用噬菌體抗體庫(kù)及基因芯片等前沿生物學(xué)技術(shù),以大腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞為材料,構(gòu)建人大腸癌自然致敏抗體Fab段噬菌體呈現(xiàn)庫(kù).從基因芯片篩選出來(lái)的通過(guò)初步驗(yàn)證與大腸癌特異性相關(guān)的基因蛋白抗原,大腸癌組織混合抗原以及CEA抗原作為固相抗原,從噬菌體抗體庫(kù)中篩選、富集抗大腸癌相關(guān)抗體,為大腸癌的特異性診斷和免疫治療提供新的手段,并為進(jìn)一步利用這些抗體篩選大腸癌相關(guān)基因并研究其功能提供庫(kù)源.結(jié)論1.成功構(gòu)建了人源性大腸癌自然致敏噬菌

2、體Fab抗體庫(kù),噬菌體抗體的庫(kù)容量達(dá)到107以上,為從噬菌體抗體庫(kù)中淘選大腸癌相關(guān)抗原的噬菌體抗體打下了良好的基礎(chǔ).2.通過(guò)基因芯片對(duì)大腸癌進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示大腸癌的發(fā)生中有眾多基因發(fā)生了分子生物學(xué)改變(個(gè)體差異存在不同),其中有1807個(gè)基因發(fā)生了顯著性變化,上調(diào)表達(dá)的基因有936個(gè),最有顯著性上調(diào)的有36個(gè);下調(diào)表達(dá)的基因有871個(gè),最有顯著性下調(diào)的有30個(gè).3.挑選了大腸癌基因芯片檢測(cè)結(jié)果中的一些基因并對(duì)其進(jìn)行了RT-PCR驗(yàn)證

3、,發(fā)現(xiàn)JUNB基因在大腸癌組織中有高表達(dá),通過(guò)文件檢索發(fā)現(xiàn)該基因很可能與大腸癌的發(fā)生有密切關(guān)聯(lián),可能是一個(gè)大腸癌基因的較特異性蛋白.4.從我們構(gòu)建的噬菌體抗體庫(kù)中淘選出來(lái)的相關(guān)抗體,通過(guò)ELISA試驗(yàn)初步鑒定,發(fā)現(xiàn)它們與相應(yīng)的抗原有較特異性的結(jié)合活性.5.淘選出來(lái)的各抗原的陽(yáng)性單克隆噬菌體抗體,經(jīng)過(guò)DNA測(cè)序及序列的同源性分析,發(fā)現(xiàn)與已經(jīng)登錄的抗體序列有90％以上的同源性,進(jìn)一步驗(yàn)證了該研究淘選出來(lái)的是噬菌體抗體是具人源性活性的抗體.6