B細(xì)胞淋巴瘤Fab噬菌體抗體庫(kù)的構(gòu)建、篩選及鑒定.pdf

1、目的：噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)是應(yīng)用基因克隆方法把全套抗體基因呈現(xiàn)在噬菌體表面，通過(guò)抗原的親和力選擇和噬菌體擴(kuò)增獲得特異性抗體基因。利用該技術(shù)可制備出多種特異性單克隆抗體片段，包括Fab、SeFv、dsFv及diabody。本研究旨在運(yùn)用噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)構(gòu)建針對(duì)B細(xì)胞淋巴瘤Raji細(xì)胞系噬菌體抗體庫(kù)并從中篩選出特異性的Fab抗體。 方法：以Raji淋巴瘤細(xì)胞免疫BALB/c小鼠，ELISA檢測(cè)抗血清滴度后，分離抗體陽(yáng)性的小鼠脾淋巴細(xì)胞，

2、提取總RNA。利用RT-PCR擴(kuò)增抗體輕鏈κ基因和重鏈Fd段，經(jīng)SacI/XbaI和XhoI/SpeI雙酶切，依次克隆入噬菌體載體pComb3H-SS的相應(yīng)酶切位點(diǎn)，并電轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL1-Blue，以輔助噬菌體VCSM13進(jìn)行超感染，構(gòu)建B細(xì)胞淋巴瘤Raji細(xì)胞系Fab噬菌體抗體庫(kù)。將Raji細(xì)胞包被6孔板，對(duì)噬菌體抗體庫(kù)進(jìn)行5輪“吸附—洗脫—擴(kuò)增”富集篩選。隨機(jī)挑選最后一輪富集篩選的單克隆在大腸桿菌XL1-Blue中進(jìn)行可溶性表達(dá)，