2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、論文題目:H!里2垡在旺疸生的麥達(dá)壁甚隆鯉擔(dān)差的HIF20t—VHL結(jié)構(gòu)建立答辯委員會主席:豳笙答辯委員會成員:』瑩噩,盞筠壑鰓溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文HIF2a在肝癌中的表達(dá)及其降解相關(guān)的HIF2aVHL結(jié)構(gòu)建工一業(yè)中文摘要目的:本文目的主要包括以下三個方面:1,確認(rèn)肝細(xì)胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)患者的肝癌組織及癌旁組織中缺氧誘導(dǎo)因子2吐(hypoxiainduciblefactor2a,HIF2

2、a)的表達(dá)情況:2,構(gòu)建HIF2aVHL復(fù)合物的三維結(jié)構(gòu)模型,分析HIF2n與希佩爾林道腫瘤抑制蛋白(vonHippel—Lindau,VHL)之間的相互作用以便深入了解HIF2a在體內(nèi)降解時被VHL識別的過程;3,比較HIF2a—VHL復(fù)合物與HIFlaVHL晶體結(jié)構(gòu)(proteindatabank,PDB)(PDBID:ILQB)的異同,為未來基于HIF2a降解相關(guān)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)來設(shè)計靶向分子藥物提供依據(jù)。方法:提取64例肝癌組織、癌

3、旁組織和2例正常肝臟組織中的DNA和RNA,應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,PCR)方法對DNA中隨機挑選的HIF2a基因3號、9號、12號外顯子進(jìn)行擴增,應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄PCR(reversetranscription—PC&RTPCR)方法合成cDNA,對cDNA中的HIF2a進(jìn)行PCR擴增,擴增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳并觀察結(jié)果:分別對肝癌組織、癌旁組織、正常肝臟組織用HIF2a抗體進(jìn)行免疫組化染色,顯

4、微鏡下觀察并記錄實驗結(jié)果;HIF2a的氨基酸序列信息從UniProt數(shù)據(jù)庫中獲取,其結(jié)構(gòu)域信息從Pfam數(shù)據(jù)庫中獲得,為獲得用于同源性建模的HIF2aC末端氧依賴降解結(jié)構(gòu)域(Cterminaloxygendependentdegradationdomain,CODD)(第516550位氨基酸)的結(jié)構(gòu),使用proteinproteinBLAST(Blastp)和positionspecificiteratedBLAST(PSIBLAsT)

5、工具在HIF2aCODD序列與PDB數(shù)據(jù)庫中多個結(jié)構(gòu)的序列之問進(jìn)行相似性搜索?;贐lastp和PSIBlast的結(jié)果,用ICMPro軟件中的ICMmodeling程序?qū)IF2aCODD進(jìn)行同源性建模,分析同源建模的結(jié)果,構(gòu)建HIF2a—VHL初始結(jié)構(gòu)模型:HIF2aCODD是HIF2a全長蛋白質(zhì)的一部分,而其中的第527542氨基酸又位于CODD的中間位置且在進(jìn)化中高度保守,因此,對HIF2a—VHL初始結(jié)構(gòu)進(jìn)行分子動力學(xué)模擬,實驗

6、設(shè)計如下:HIF2a第527—542位氨基酸固定一段時間,先讓兩端的第516526位和第543550位氨基酸移動到相對合理的位置,然后,把第516—550位所有的氨基酸放開進(jìn)行分子動力學(xué)模擬以獲得最合理的結(jié)構(gòu)。共設(shè)定4組條件,分別是:放開所有氨基酸,300K,32ns;放開所有氨基酸,310K,24ns:12ns固定部分氨基酸加44ns放開所有氨基酸,300K;28ns固定部分氨基酸加20ns放開所有氨基酸,300K。最終獲得的結(jié)構(gòu)與實

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