HIF-1α和2α基因表達與PTC及其臨床病理相關性研究.pdf

1、目的:
　　檢測缺氧誘導因子(hypoxia inducible factor，HIF)1α和2α在甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)及正常甲狀腺組織中mRNA及蛋白水平表達情況，分析HIF-1α基因和HIF-2α基因表達與PTC及其臨床病理的相關性。探討它們與PTC進展的關系及其生物學意義。
　　方法:
　　1.標本來源
　　收集2013年1月至2013年06月臺州

2、市中心醫(yī)院腫瘤外科手術切除組織標本共60例。其中實驗組甲狀腺乳頭狀癌30例，男性11例，女性19例，年齡22-67歲，平均44.6歲，根據(jù)患者年齡、性別、腫瘤大小、淋巴結轉(zhuǎn)移、是否伴鈣化、是否合并橋本病、是否侵犯包膜分成7個亞組，其中實驗組中年齡≥45歲18例，＜45歲12例;腫瘤直徑＞2cm的12例，腫瘤直徑≤2cm的18例;伴淋巴結轉(zhuǎn)移10例，無淋巴結轉(zhuǎn)移20例;對照組為隨機選取的結節(jié)性甲狀腺腫手術標本30例，男性14例，女性16例

3、，年齡21-77歲，平均43.2歲。標本體積約5×5mm-20×20mm大小，2/3于20min內(nèi)置于-80℃冰箱中保存，用于實時定量PCR及Western Blot檢測;將剩下的1/3組織放于10％甲醛溶液中固定，后進行石蠟包埋，切片后進行免疫組織化學檢測。所有標本均經(jīng)病理證實。所有患者手術之前均未接受過內(nèi)分泌治療或內(nèi)照射等治療。
　　2.方法
　　2.1 實時定量PCR(RealTime-PCR):分別檢測甲狀腺乳頭狀癌

4、及對照組中HIF-1α、HIF-2α基因mRNA的表達情況，組間定量資料采用t檢驗，P＜0.05認為有統(tǒng)計學差異，P＜0.01為統(tǒng)計學顯著差異。
　　2.2 蛋白質(zhì)雜交(Western blot):分別檢測甲狀腺乳頭狀癌組織及結節(jié)性甲狀腺組中HIF-1α、HIF-2α蛋白表達情況并進行對比分析，組間采用t檢驗，P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.01為統(tǒng)計學顯著差異。
　　2.3 免疫組織化學（Immunohistoc

5、hemistry，IHC）:分別檢測結節(jié)性甲狀腺腫及甲狀腺乳頭狀癌組中HIF-1α、HIF-2α蛋白表達情況及分布情況，組間差異采用卡方檢驗，P＜0.05認為有統(tǒng)計學差異，P＜0.01為統(tǒng)計學顯著差異;同時分析HIF-1α、HIF-2α蛋白表達的相關性，并分析它們在不同臨床病理階段的表達差異。
　　結果:
　　1.Real-time PCR:甲狀腺乳頭狀癌組織較對照組中HIF-1α mRNA表達升高，P＜0.05，具有統(tǒng)計學

6、差異，同時，HIF-2α mRNA的表達量也較對照組明顯升高P＜0.05，有統(tǒng)計學意義，且兩者在基因表達水平上無相關性。
　　2.Western blot: HIF-1α蛋白在甲狀腺癌中的蛋白表達量較對照組中明顯增高，結果經(jīng)t檢驗，P＜0.01，有顯著統(tǒng)計學差異;HIF-2α蛋白表達量也較對照組升高，P＜0.05，有統(tǒng)計學意義。
　　3.IHC: HIF-1α蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達呈強陽性，且胞核、胞漿均有表達，而在

7、對照組中表達為弱陽性或陰性，HIF-2α蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中呈強陽性表達，且以胞漿表達為主，而在對照組中表達為弱陽性或陰性。P＜0.01，具有顯著統(tǒng)計學差異;并且它們的表達結果與性別、年齡、腫瘤大小、鈣化、分期、侵犯包膜及橋本病均無關，HIF-1α與淋巴結轉(zhuǎn)移相關，而HIF-2α與淋巴結轉(zhuǎn)移無相關;并且兩者在甲狀腺癌中的表達無相關性。
　　結論:
　　1.在甲狀腺乳頭狀癌組織中，HIF-1α、HIF-2α在mRNA及蛋