抑癌基因PLCD1在結腸癌中的甲基化及其功能研究.pdf

1、目的：檢測PLCD1在結腸癌組織及細胞中的表達及甲基化情況，檢驗PLCD1在結腸癌中的抑癌作用并初步探討其抑癌機制。
　　方法：運用免疫組化、RT-PCR檢測結腸癌組織及細胞中 PLCD1表達。采用MSP和BGS實驗檢測結腸癌細胞株中PLCD1甲基化情況。用去甲基化藥物（Aza+TSA）處理誘導結腸癌細胞株（HCT-15、Caco-2）,進一步證實 PLCD1表達缺失是因啟動子甲基化所致。構建穩(wěn)定表達PLCD1的結腸癌細胞株HCT

2、-15、Caco-2，通過一系列功能實驗，如克隆形成實驗、CCK8實驗、Transwell遷移侵襲實驗和流式細胞技術，分析過表達PLCD1在體外對結腸癌增殖、遷移、侵襲、周期及凋亡的影響。利用裸鼠成瘤實驗，觀察PLCD1對腫瘤生長的影響。運用Western方法分析PLCD1對相關信號通路的影響，初步探討PLCD1發(fā)揮抑癌作用的可能分子機制。
　　結果： PLCD1基因啟動子區(qū)在53.8％（7/13）結腸癌細胞株中存在甲基化。選擇

3、PLCD1表達缺失的結腸癌細胞株 HCT-15，運用去甲基化藥物Aza+TSA誘導處理后發(fā)現PLCD1重新表達。細胞株HCT-15、Caco-2重新表達PLCD1可以顯著抑制細胞增殖、遷移及侵襲，促進凋亡，使細胞周期阻滯于 G1期（P<0.001）。裸鼠成瘤實驗顯示 PLCD1于體內可明顯抑制結腸癌的生長（P<0.05）。Western結果發(fā)現PLCD1通過上調p53通路對細胞增殖產生影響。
　　結論：在結腸癌中，PLCD1因啟動