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文檔簡介
1、目的:
本研究通過在多株乳腺癌細(xì)胞和大量臨床乳腺癌樣本中檢測抑癌基因ADAMTS9的表達(dá)及甲基化狀態(tài),分析其與臨床分期、分級(jí)之間的關(guān)系,闡明抑癌基因是否是具有臨床意義的表觀遺傳學(xué)標(biāo)志物,從而為乳腺癌早期診斷和指導(dǎo)合理的“個(gè)體化治療”提供有價(jià)值的科學(xué)依據(jù);通過對(duì)抑癌基因ADAMTS9的抑癌作用及機(jī)理的研究,為闡明乳腺癌癌變的機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。
方法:
1,利用RT-PCR方法檢測人體正常組織和胚胎組織以及乳腺
2、癌細(xì)胞株(BT549,MB231,MB468,MCF7,SK-BR-3,T47D,YCC-B1,YCC-B3)和正常乳腺組織中ADAMTS9的表達(dá)情況。
2,在線GOBO數(shù)據(jù)庫分析ADMATS9的表達(dá)與乳腺癌組織學(xué)分級(jí)、分期、受體的相關(guān)性。
3,采用MSP和BGS方法檢測基因ADAMTS9在乳腺癌細(xì)胞株及乳腺癌組織、癌邊緣組織和正常組織中的甲基化情況并分析其啟動(dòng)子甲基化情況與乳腺癌臨床病理相關(guān)性。
4,利用
3、去甲基化藥物處理誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞,以證實(shí)ADAMTS9表達(dá)缺失是因啟動(dòng)子甲基化直接所致并分析其啟動(dòng)子甲基化情況與乳腺癌臨床病理相關(guān)性。
5,將ADAMTS9轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞株BT549,通過克隆形成實(shí)驗(yàn)、CCK8、Transwell遷移侵襲實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀技術(shù)分析基因的表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞生長、遷移能力、凋亡、周期及血管形成的影響
結(jié)果:
1,ADAMTS9廣泛表達(dá)于人體各個(gè)組織器官,包括正常乳腺組織,在乳腺癌細(xì)胞
4、株中表達(dá)顯著減弱或缺失,啟動(dòng)子頻繁發(fā)生甲基化改變。
2,GOBO數(shù)據(jù)庫顯示ADAMTS9在Normal-like乳腺癌分型中的表達(dá)最高,而在Lumb型乳腺癌中的表達(dá)最低。在雌激素受體(Estrogenreceptor,ER)陽性的乳腺癌組中,ADAMTS9的表達(dá)低于雌激素受體陰性乳腺癌。同時(shí),分析結(jié)果也顯示,在乳腺癌組織學(xué)分級(jí)中,ADAMTS9在Grade1中的表達(dá)最高,而在Grade3中表達(dá)最低。
3,Aza+TS
5、A處理ADAMTS9表達(dá)下調(diào)或缺失的乳腺癌細(xì)胞株,經(jīng)去甲基化處理后在乳腺癌細(xì)胞株重新表達(dá)。
4,ADAMTS9基因啟動(dòng)子在93例乳腺癌組織有44例啟動(dòng)子區(qū)存在甲基化,甲基化率為44%,而在癌旁及正常組織中沒有甲基化,統(tǒng)計(jì)分析顯示ADANTS9啟動(dòng)子異常甲基化與乳腺癌HER2狀態(tài)存在相關(guān)性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
5,在細(xì)胞株BT549中重新表達(dá)ADAMTS9可以顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的生長遷移侵襲,促進(jìn)其凋亡,且流式分析顯
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